Blaulichttherapie bei arzneimittelresistenten bakteriellen Infektionen in Brandwunden in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Wang, Y., et al. In vivo Untersuchung der antimikrobiellen Blaulichttherapie für multiresistente Acinetobacter baumannii-Brandinfektionen mittels Biolumineszenzbildgebung. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video demonstriert das Verfahren zur Behandlung von Brandwundinfektionen, die durch biolumineszente, arzneimittelresistente Bakterien bei Mäusen mit Blaulichttherapie verursacht werden, gefolgt von Biolumineszenzbildgebung zur Überwachung der Behandlungswirksamkeit.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.

1. Antimikrobielle Blaulichttherapie bei A. baumannii-Infektion bei Mäusen

1. Betäuben Sie die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion eines Ketamin-Xylazin-Cocktails (100 mg/kg - 20 mg/kg). Das Fehlen des palpebralen Reflexes deutet auf eine angemessene anästhetische Tiefe hin.
2. Teilen Sie die Mäuse zufällig in eine aBL-behandelte Gruppe (n = 10) und eine unbehandelte Kontrollgruppe (n = 10) ein.
3. Für die mit antimikrobielles blauem Licht (aBL) behandelte Gruppe sollten die Augen der Mäuse mit Alufolie bedeckt werden, um eine Überexposition gegenüber Licht zu vermeiden. Platzieren Sie die Mausverbrennungen direkt unter die Leuchtdiode (LED), mit dem Deckel einer 35-mm-Petrischale unter dem Bauch, um den Rücken waagerecht zu halten.
4. Ersetze das in Schritt 3.5 erwähnte Leistungs-/Energiemessgerät durch eine Maus auf einer quadratischen Petrischale. Stellen Sie die Maushöhe wieder so ein, dass der Abstand zwischen der LED-Blende und der Mausverbrennungsfläche dem Abstand zwischen der LED-Blende und dem Pegel des Lichtsensors des Leistungs-/Energiemessers entspricht.
5. Bestrahlen Sie die infizierten Verbrennungen mit einer Bestrahlung von 100 mW/cm^². Abgeben Sie aBL in Dosen von 72 J/cm² , bis eine Gesamtdosis von 360 J/cm² erreicht ist (z. B. 0, 72, 144, 216, 288 und 360 J/cm²). Nach jeder Lichtdosis wird eine Biolumineszenzbildgebung für die Mäuse durchgeführt.
6. Für die unbehandelte Kontrollgruppe wird eine Biolumineszenzbildgebung der Mausverbrennungen durchgeführt, wobei die gleichen Zeitintervalle wie bei der aBL-behandelten Gruppe verwendet werden.
7. Vor der Genesung der Mäuse werden sie auf das wasserbeheizte OP-Bett gelegt, um Wärmeverlust und Unterkühlung zu verhindern. Beobachten Sie die Aktivität und den palpebralen Reflex der Mäuse bis zur Genesung. Nach der Genesung der Mäuse halten Sie sie 2-3 pro Käfig unter.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Serie III	Präklinische In-vivo-Bildgebung
LED-Leuchtdiode	VieLight Inc, Toronto, Kanada	415 nm	Lichtquelle zur Beleuchtung
Leistungs-/Energiezähler	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Lichtbestrahlungsdetektor
Maus	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 Wochen alt, 17-19 g Gewicht
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	Klinisches Isolat	Technisch entwickelte lumineszente Spannung
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 1x Lösung	Fisher Scientific	BP24384	Ein Standardphosphatpuffer, der in vielen biomolekularen Verfahren verwendet wird
Fisher Scientific Redi-Tip Pipetspitzen, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Pipetspitzen
Messingblock	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm mal 10 mm	Zur Entstehung von Verbrennungen bei Mäusen
Extreme Dragon PBI/Kevlar-Handschuhe mit hoher Hitze	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Hitzebeständige Handschuhe
Greiner-Gerichte	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Corning Digital Hot Plate	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, zum Kochen von Wasser
Maus-/Ratten-Dünnlinien-Wasserbeheiztes OP-Bett	E-Z-Systeme	EZ-211	Verhindert Wärmeverlust und Unterkühlung während der Operation
Vet-Salbe	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5 %, Augensalbe	Augensalbe zur Vorbeugung von Augentrockenheit