Bildgebung morphologischer Veränderungen bei Bakterien mittels lebender Zellfluoreszenzmikroskopie

Abstract

Quelle: Brzozowski, R. S. et al. Live-Cell-Fluoreszenzmikroskopie zur Untersuchung der subzellulären Proteinlokalisierung und Veränderungen der Zellmorphologie bei Bakterien. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert die Fluoreszenzmikroskopie mit lebenden Zellen, um morphologische Veränderungen in Echtzeit bei Bakterien zu visualisieren. Es beschreibt die Schritte, die für Bildgebung, Zeitrafferaufnahme und Dekonvolution erforderlich sind, um hochauflösende Bilder in Echtzeit zu erhalten.

Protocol

1. Bildverarbeitung

1. Am Tag des Experiments schalten Sie das Mikroskopsystem ein. Starten Sie die Bildbearbeitungssoftware (siehe Materialtabelle), indem Sie auf das entsprechende Symbol auf dem Desktop klicken. Initialisieren Sie das Mikroskop, indem Sie im Startfenster der Software auf die Option "Mikroskop initialisieren " (mit einem Mikroskop gezeigten Button) klicken. Stellen Sie sicher, dass das Ziel vor der Initialisierung mit der groben Einstellung des Mikroskops vollständig abgesenkt wird.
   HINWEIS: Nach der Initialisierung sollten zusätzlich zum Startmenü drei zusätzliche Dialogfenster erscheinen: ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	Fisher-BioReagenzien	BP160-100	Molekularbiologie-Note – Niedriger EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Mikroskopie
Schüssel mit Glasboden	MatTek	P35G-1.5-14-C	Mikroskopie
Mikroskop	GE	DeltaVision Elite	Angepasster Olympus IX-71 Spiegel mit umgekehrtem Mikroskop; Maßgeschneiderter Beleuchtungsturm und Transmit-Light-Illuminator-Modul. Ziele: PLAPON 60X (N.A. 1,42, WD 0,15 mm); OLY 100X ÖL (N.A. 1,4, WD 0,12 mm); DIC Prism Nomarski für 100-faches Ziel; CoolSnap HQ2 Kamera; SSI Assembly 7-Color; Umweltschutzkammer – undurchsichtig.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	FtsZ-Inhibitor
SoftWorx	GE		Hersteller bereitgestellte Bildgebungssoftware