Visualisierung von pathogeninduziertem oxidativem Stress in C. elegans mit GFP-markierten SKN-1

Abstract

Quelle: Naji, A. et al. Untersuchung des oxidativen Stress, der durch die Mitisgruppe Streptokokken in Caenorhabditis elegans verursacht wird. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert die Verwendung von grün fluoreszierendem Protein markierten SKN-1 in C. elegans zur Überwachung oxidativen Stresses durch Verfolgung der grünen Fluoreszenz. Würmer, die S. gordonii ausgesetzt waren, zeigen eine starke nukleare Fluoreszenz, was pathogeninduzierten Stress bestätigt, während diejenigen, die mit E. coli gefüttert werden, diffuse grüne Fluoreszenz im Zytoplasma zeigen, was auf eine minimale SKN-1-Aktivierung hinweist.

Protocol

1. Beobachtung der SKN-1-Lokalisierung als Reaktion auf eine Streptococcus-gordonii-Infektion

1. Fügen Sie ~100 L4-L4-Larven zu jedem Todd–Hewitt-Hefeextrakt (THY), das mit Streptococcus besät ist, sowie zu jedem mit Escherichia coli (E. coli) besäten Agarplatten (NGM) ~100 L4-Larven hinzu. Verwenden Sie drei Platten pro Bakterienstamm. Inkubieren Sie die Platten 2 bis 3 Stunden bei 25 °C.
2. Anschließend werden die Platten aus dem Inkubator entfernt, mit einem modifizierten M9-Puffer (M9W) gewaschen und die Würmer in 15-mL konischen Röhren gesammelt.
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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Medien und Chemikalien
BD Bacto Todd Hewitt Brühe	Fisher Scientific	DF0492-17-6
15 mL konische, sterile Polypropylen-Zentrifugenröhren	Fisher Scientific	12-565-269
Natriumazid	Sigma Aldrich	S2002-25G
Tetramisolhydrochlorid	Sigma Aldrich	L9756
Nr. 1.5 18 mm x 18 mm Abdeckungen	Fisher Scientific	12-541A
Agarose	Sigma Aldrich	A9539-50G
LD002	IdIs1	SKN-1B/C::GFP + rol-6(su1006)	Keith Blackwell