Dieses Video demonstriert einen fluoreszenzbasierten Test zur Untersuchung der Wechselwirkung zwischen einem Makrophagerezeptor und Mycobacterium tuberculosis-Antigenen . Fluoreszierend markierte Antigene auf einem Deckzettel werden mit Makrophagen-Proteinextrakten inkubiert, vernetzt, mit Antikörpern markiert und durch überlappende Fluoreszenzsignale visualisiert.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Fluoreszenzbasierter Assay zur Untersuchung von Makrophagenrezeptor-Interaktionen mit bakteriellen Antigenen
194 Aufrufe
⸱
31. März 2026
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
1. Mycobacterium tuberculosis – SLAMF1-Wechselwirkung mittels Fluoreszenzmikroskopie
- Bakterien-Protein-Vernetzung
- Führen Sie 12-mm-runde Deckschichten mit einer rundnasigen chirurgischen Pinzette in 24-Bohrloch-Kulturplatten (1 Deckschicht pro Bohrloch) ein.
HINWEIS: Reinigen Sie die Überdeckfolien gründlich mit 70 % Ethanol. Bei Wunsch können sie autoklaviert oder 30 Minuten lang unter UV-Licht sterilisiert werden. - Inkubieren Sie den Deckmantel über Nacht mit 400 μL 10 μg/mL Poly-D-Lysin bei 4 °C. Decken Sie die Platte mit Alufolie ab....
- Führen Sie 12-mm-runde Deckschichten mit einer rundnasigen chirurgischen Pinzette in 24-Bohrloch-Kulturplatten (1 Deckschicht pro Bohrloch) ein.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488 Sekundärantikörper | Invitrogen | A21121 | Für die Fluoreszenzmikroskopie |
| Anti-SLAMF1 Primärantikörper | BioLegend | 306302 | Für die Fluoreszenzmikroskopie |
| Aqua-Poly/Montierung | Polywissenschaften | 18606-20 | Montagemedien |
| Deckfolien 12mm | HDA | - | Für den Interaktionstest mittels Mikroskopie |
| EGS | ThermoFisher Scientific | 21565 | Zur Vernetzungsbehandlung |
| Formaldehyd | Merck | K47740803613 | Zur Vernetzungsbehandlung |
| Glasrutschen | Glass Klass | - | Für den Interaktionstest mittels Mikroskopie |
| Glycin | Sigma | G8898 | Zur Vernetzungsbehandlung |
| Imager.A2 | Carl Zeiss | 430005-9901-000 | Fluoreszenzmikroskop mit Colibri 7 Beleuchtungsmodul |
| Poly-D-Lysin | Sigma Aldrich | A-003-M | Für die Behandlung von Coverslips |
| Rhodamin B | Sigma Aldrich | 21955 | Für M. Tuberkulose-Färbung |
