Überwachung der bakteriellen Besiedlung von Arabidopsis thaliana-Wurzeln in einem bodenlosen System

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Harris, S. L. et al. Überwachung der bakteriellen Besiedlung und Pflege von Arabidopsis-thaliana-Wurzeln in einem schwimmenden hydroponischen System. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur Überwachung der Kolonisierung von wurzelassoziierten Bakterien auf Arabidopsis thaliana-Setzlingen , die in einem bodenlosen System wachsen. Nach der Besiedlung werden Bakterien durch Sonikation verdrängt, dann verdünnt, plattiert und inkubiert, um Kolonien zu bilden, die die bakterielle Bindung und Lebensfähigkeit widerspiegeln.

Protokoll

Sammlung von Bakterien für lebensfähige Zellzählungen

HINWEIS: Die Anzahl der Bakterien pro Keimlingswurzel kann zu jedem Inkubationszeitpunkt bestimmt werden. Die Besiedlung kann zwischen 0 und 18 Stunden überwacht werden, während die Pflege ab 18 Stunden überwacht werden kann.

Entfernen Sie die Setzlinge aus dem Netz (Abbildung 1, Schritt 5). Setzen Sie die flammensterilisierten Zangen vorsichtig unter die Blätter (aber auf der Blattseite des Netzes) und kneifen Sie leicht den Stiel. Schieben Sie die Setzlinge nach oben und weg vom Netz, um die Wurzel zu lösen, ohne sie zu brechen. Wenn die Wurzel bricht, kratze vorsichtig am Netzboden, um die gesamte Länge zu sammeln.
Entferne Bakterien aus den Pflanzenwurzeln. Übertragen Sie die Bakterien in Brunnen einer 24-Well-Platte mit 1 ml ddH₂0. Sonikiere die Proben.
Quantifiziere die Bakterien an den Wurzeln.
1. Führen Sie serielle 10-fache Verdünnungen der sonizierten Proben bis zu einer ^10-6-fachen Verdünnung im bakteriellen Wachstumsmedium durch. Fügen Sie 50 μL jeder Verdünnung auf einzelne Agarplatten hinzu und streuen Sie sie mit sterilen Glasperlen auf. Inkubiere Platten bei der optimalen Temperatur für Bakterien, bis einzelne Kolonien zählbar sind.

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Ergebnisse

Abbildung 1: Test auf bakterielle Besiedlung und Pflege an A. thaliana-Wurzeln . A. thaliana-Setzlinge , die auf sterilisiertem Kunststoffnetz gezogen wurden, wurden in ein für Bakterien optimiertes Wachstumsmedium übertragen [hie...