Etablierung einer bakteriellen Infektion bei Drosophila-Larven

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Hiroyasu, A., D et al., Extraktion von Hämozyten aus Drosophila melanogaster-Larven zur mikrobiellen Infektion und Analyse. J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video zeigt das Verfahren, um eine bakterielle Infektion bei Drosophila-Larven zu etablieren, indem sie in einen bakteriellen Tropfen gesetzt und mit einer Wolframnadel gesticht werden. Die Larven werden dann auf einer gerillten, nährstoffreichen Agarplatte inkubiert, um die Interaktionen zwischen Wirt und Pathogen zu untersuchen.

Protokoll

1. In-vivo-Infektion

Erwärmen Sie den Drosophila-Fruchtsaft-Agar-Teller 15 Minuten bei Zimmertemperatur.
1. Gib 30 g Agar zu 700 ml Wasser und autoklaviere es für 40 Minuten.
2. Lösen Sie 0,5 g Methylparaben in 10 mL absolutes Ethanol.
3. Gib die Methylparabenlösung zu 300 ml Fruchtsaftkonzentrat hinzu.
4. Schnell das Saftkonzentrat in die autoklavierte Agar-Lösung mischen und 5 ml in 10 × 35 mm große Petrischalen geben.
5. Nachdem die Teller 15 Minuten abgekühlt sind, lagern Sie sie bei 4 °C.
Bereite Larven des dritten Stadiums vor.
Legen Sie die Hefepaste auf eine Agarplatte. Schneiden Sie einen feinen Schnitt in die Agarplatte, wo die Larven wandern können, um das Trocknen zu vermeiden (Abbildung 1A). Bauen Sie eine 0,001 mm spitze Wolframnadel mit Haltepinzetten mit Paraffinfilm zusammen (Abbildung 1B, C).
Pipette 50 μL hochtiter mCherry-exprimierende Coxiella burnetii (5,95×10⁹ GE/mL) auf die Paraffinfolie unter dem Stereomikroskop und lege die Larven in den Bakterienpool.
Setzen Sie die Larven in den Bakterienpool, stechen Sie sie mit einer Wolframnadel (Abbildung 3D) und übertragen sie auf eine Agarplatte (Abbildung 1E).
Übertragen Sie das verbleibende Pathogenmedium auf die Agarplatte und versiegeln Sie die Platte mit einer Paraffinfolie.
Lassen Sie die Larven bis zur gewünschten Zeit nach der Infektion in feuchter Luft auf der Platte (Abbildung 1F). In diesem Experiment befinden sich C. burnetii-infizierte Larven für 24 Stunden auf der Platte.

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Ergebnisse

Abbildung 1: In-vivo-Infektion. A) Drosophila-Fruchtsaft-Agarplatten und Hefepaste werden für die Inkubation von in vivo infizierten Larven verwendet. In der Agarplatte werden Schnitte gemacht, um die Larvenlebe...