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31. März 2026
Dieses Video demonstriert ein in-vitro-Darm-Host-Mikroben-Modell zur Untersuchung der bakteriellen Lebensfähigkeit. Eine Kokultur von Caco-2- und HT29-MTX-Zellen wird mit Bakterien inkubiert, die unter simulierten Verdauungsbedingungen vorbehandelt wurden. Die Integrität der Epithelbarriere wird mit transepithelialem elektrischem Widerstand bewertet, und Fraktionen aus dem Medium, löslichem Schleim, Zelllysat und Zellresten werden für die nachgelagerte Analyse gesammelt.
1. Stämme und Kulturbedingungen
HINWEIS: Die synthetische orale Gemeinschaft bestand aus Stämmen, die häufig im oralen Mikrobiom vorkommen.
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| SPANNUNGEN | |||
| Aggregatibacter actinomycetemcomitans | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 43718 | |
| Fusobacterium nucleatum | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 10953 | |
| Porphyromonas gingivalis | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 33277 | |
| Prevotella intermedia | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 25611 | |
| Streptococcus mutans | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 25175 | |
| Streptococcus sobrinus | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 33478 | |
| Actinomyces viscosus | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 15987 | |
| Streptococcus salivarius TOVE-R | |||
| Streptococcus mitis | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 49456 | |
| Streptococcus sanguinis | BCCM/LMG-Bakteriensammlung | LMG 14657 | |
| Veillonella parvula | Leibniz-Institut DSMZ – Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen | DSM 2007 | |
| Streptococcus gordonii | Sammlung der amerikanischen Typkultur | ATCC 49818 | |
| ZELLLINIEN | |||
| Caco-2-Zellen | Europäische Sammlung authentifizierter Zellkulturen | 86010202 | |
| HT29-MTX-Zellen | Europäische Sammlung authentifizierter Zellkulturen | 12040401 | |
| REAGENZIEN UND VERBRAUCHSGÜTER | |||
| Brain Heart Infusion (BHI) Brühe | Oxoid | CM1135 | |
| Blood Agar 2 | Oxoid | CM0055 | Blood Agar-Medium |
| Menadione | Sigma | M9429 | |
| Hemin | Sigma | H9039 | |
| 5 % steriles, defibriniertes Pferdeblut | E&O Laboratories Ltd, | P030 | |
| InnuPREP PCRpure Kit | Analytik Jena | 845-KS-5010250 | PCR-Reinigungskit |
| Big Dye | Angewandte Biosysteme | 4337454 | Farbstoff für die Sequenzierung |
| ABI Prism BigDye Terminator v3.1 Zyklus-Sequenzierungskit | Angewandte Biosysteme | 4337456 | |
| SYBR Green I | Invitrogen | S7585 | |
| Propidiumiodid | Invitrogen | P1304MP | |
| T25-Kulturflaschen unbeschichtet, Zellkultur behandelt, entlüftet, steril | VWR | 734-2311 | |
| Trypsin-EDTA-Lösung | Sigma-Aldrich | T3924-100ML | |
| Trypan Blue Lösung 0,4 %, flüssig, steril gefiltert | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) | Gibco | 14190250 | |
| DMEM-Zellkulturmedien mit GlutaMAX und Pyruvat | Lebenstechnologien | 31966-047 | |
| Corning Transwell Polyestermembran-Zellkultur-Einsätze | Sigma-Aldrich | CLS3450-24EA | |
| Mucin aus dem Schweinemagen Typ II | Sigma-Aldrich | M2378 | |
| Inaktiviertes fetales Rinderserum | Greiner Bio One | 758093 | |
| Antibiotikum-Antimykotikum (100X) | Gibco | 15240062 | |
| Triton X 100 für Molekularbiologie | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| DPBS ohne Kalzium, Magnesium | Gibco | 14190-250 | |
| Pierce LDH Zytotoxizitäts-Assay Kit | Thermo Fisher Scientific | 88953 | |
| Corning HTS Transwell-24-Bohrloch, Porengröße 0,4 μm | Corning Costar Corp | 3450 | |
| Nukleasefreies Wasser | Serva-Elektrophorese | 28539010 | |
| AUSRÜSTUNG | |||
| Neubauer Zählkammer verbessert | Carl Roth | T729.1 | |
| BD Accuri C6 Durchflusszytometer | BD Biosciences | 653118 | |
| PowerLyzer 24 Homogenizer | MoBio | 13155 | |
| T100 Thermocycler | BioRad | 186-1096 | |
| Spülsystem | Maßgefertigt | - | |
| InnOva 4080 Inkubator-Shaker | New Brunswick Scientific | 8261-30-1007 | Shaker für 2.10 |
| Memmert CO₂-Inkubator | Memmert GmbH & Co. | ICO150med | |
| Millicell ERS (elektrisches Widerstandssystem) | EMD Millipore, Merck KGaA | MERS00002 | |
| Millipore Milli-Q akademisches, ultrareines Wassersystem | Millipore, Merck KGaA | - | |
| Shaker (ROCKER 3D Basic) | IKA | 4000000 | Shaker für 6.10 |
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