Intranasale Infektion von Mäusen mit dem Murinen Herpesvirus zur Untersuchung der Immunantwort des Wirts

Zusammenfassung

Quelle: Zhang, J., et al. P. Untersuchung der angeborenen Immunsignalübertragung bei der viralen Umgehung der Zytokinproduktion. J. Vis. Exp. (2014)

Dieses Video demonstriert die intranasale Applikation von murinem Herpesvirus bei Mäusen, um eine auf die Lunge beschränkte Immunantwort auszulösen. Anschließend wird das Lungen­gewebe aufbereitet, um Zytokin-haltige Überstände zur weiteren Analyse der Wirts­immun­antworten zu gewinnen.

Protokoll

Alle Verfahren, die tierische Modelle betreffen, wurden von dem lokalen institutionellen Ausschuss für Tierschutz und dem JoVE-Fachausschuss für tiermedizinische Überprüfungen geprüft.

1. Zytokinausschüttung mittels ELISA in γHV68-infizierten Mäusen

1. Narkotisieren Sie geschlechtsgleiche C57BL/6-(B6-)Würfe (6–8 Wochen alt, 8–12 Mäuse/Gruppe), indem Sie 1,5 mg Ketamin/0,12 mg Xylazin intraperitoneal injizieren, und impfen Sie intranasal mit 40 PFU (Plaque-bildende Einheit) von γHV68 in 40 µl. Töten Sie die Mäuse zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Infektion durch Inhalation von CO₂, gefolgt von zervikaler Dislokation.
2. Öffnen Sie den Brustkorb mit einem seitlichen Schnitt entlang des Brustbeins und schneiden Sie mit einer scharfen Schere durch die Rippen. Sammeln Sie das Lungengewebe.
3. Geben Sie die Hälfte des Lungengewebes (linkes Lappen) in sterile 1,5-ml-Schraubverschlussgefäße, die 500 µl 1,0-mm-Zirkonia/Silica-Kügelchen enthalten. Fügen Sie 1 ml kaltes, serumfreies DMEM (Dulbeccos modifiziertes Eagles Medium) hinzu und homogenisieren Sie das Lungengewebe durch Kügelchenzerstörung für 30 Sekunden. Kühlen Sie die Röhrchen 2 Minuten lang auf Eis ab und wiederholen Sie diesen Vorgang einmal.
4. Zentrifugieren Sie die Röhrchen (15.000 × g für 10 Minuten) bei 4 °C, sammeln Sie den Überstand und messen Sie die Zytokinproduktion, wie unten beschrieben.
5. Messen Sie Zytokine mithilfe kommerziell erhältlicher Zytokin-ELISA-(Enzyme-Linked-ImmunoSorbent-Assay-)Kits gemäß den Herstelleranweisungen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Maus-CCL5-ELISA-Kit	R&D Systems	DY478
1,0 mm Zirkonia/Silica-Kügelchen	BioSpec Products	11079110z