Virales Wachstum und Techniken

Source: Tang, N., et al. Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the clonal isolation and PCR-based screening of recombinant herpesvirus following site-specific excision of a GFP marker. Fluorescence-activated cell sorting is used to isolate non-fluorescent infected cells, and junction PCR confirms retention of the target gene in GFP-negative clones.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the isolation of Arthrobacter bacteriophages from a soil sample using enrichment and plaque assay techniques. It highlights the infection, amplification, and visualization of phages as clear lysis zones formed on a bacterial lawn.

Source: Morales Vasquez, D., et al. Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the protocol for carrying out plaque assay–based viral titration for quantifying infectious virus levels in tissue sample collected from a virus–infected mouse model.

Source: Vijayraghavan, S., Kantor, B. A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the procedure for generating recombinant viral particles by transfecting embryonic kidney cells with plasmids encoding viral proteins and a gene of interest.

Source: Rustad, M., et.al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the purification of bacteriophages from a suspension containing host bacterial debris using a sucrose density gradient. It shows how the density gradient separates phages by buoyant density, enabling recovery of a visible band for resuspension and further analysis.

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates the propagation and harvesting of oncolytic herpes simplex virus in mammalian cell cultures, highlighting viral entry, replication, and the recovery of virus-loaded cells. It further shows methods for preserving infected cells for downstream processing.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the purification of an oncolytic virus from infected mammalian cell cultures using nuclease treatment, sequential centrifugation, membrane filtration, and sucrose cushion centrifugation.

Source: Huang, D., et al. Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the step-by-step procedure for the in vitro isolation of mosquito-associated viruses from mosquito homogenates using fibroblast-like mammalian cells.

Source: Eggers, C. H. Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the isolation of borrelial phage particles from a Borrelia burgdorferi suspension using polyethylene glycol-mediated phase separation. The sample is centrifuged, treated with a salt solution, and a molecular crowding agent to precipitate phages. Chloroform extraction is done to remove debris and concentrate phage particles. The purified phage...

Source: Pett, N., et al. T4 Bacteriophage and E. coli Interaction in the Murine Intestine: A Prototypical Model for Studying Host-Bacteriophage Dynamics In Vivo. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the purification of bacteriophages from bacterial cell lysates using sequential centrifugation, membrane filtration, chloroform extraction, centrifugal filtration, and buffer exchange to obtain a purified phage preparation.

Source: Van Lidth de Jeude, et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the process of producing viral particles through transfection of embryonic kidney cells with plasmid–polyethylenimine complexes, which leads to viral genome expression, particle assembly, and virus collection in the medium.

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp.(2018)This video demonstrates preparation of a bacteriophage lysate containing transducing particles. A donor strain is infected, plaques form, and the soft agar overlay is processed with chloroform to yield a clarified lysate for downstream analysis.

Quelle: Weger-Lucarelli, J., et al. Rettung und Charakterisierung rekombinanter Viren aus einem infektiösen Klon des Zika-Virus der Neuen Welt. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video demonstriert die Gewinnung infektiösen Zika-Virus mittels Elektroporation von in vitro transkribierter RNA. Der Prozess zeigt, wie synthetische RNA eine Infektion auslöst und zur viralen Replikation in Kultivierzellen führt.

Quelle: Mackler, R. M., et al. Herstellung und Reinigung von Prototyp-Foamy-Virus-Intasomen. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video zeigt die Reinigung von Prototyp-Foamy-Virus-(PFV)-Intasomen aus einer gemischten Protein-DNA-Suspension mittels Salzextraktion und Größenauschlusschromatographie, wodurch aktive Komplexe für die nachgeschaltete Analyse erhalten werden.

Quelle: Suzuki, Y., et al. Messung der Dengue-Virus-RNA im Kulturüberstand infizierter Zellen mittels Echtzeit-quantitativer Polymerase-Kettenreaktion. J. Vis. Exp. (2018).Dieses Video zeigt das Verfahren zur Probenvorbereitung für die quantitative PCR-Analyse (Polymerase-Kettenreaktion). Virale Proben und RNA-Standards werden seriell verdünnt, mit einem Proteinase-K-Puffer behandelt und unter kontrollierten Temperaturen inkubiert, um die RNA freizusetzen. Die aufbereitete RNA wird anschließend...

Quelle: Dembowski, J. A., et al. Aufreinigung viraler DNA zur Identifizierung assoziierter viral bedingter und zellulärer Proteine. J. Vis. Exp. (2017).Dieses Video demonstriert die Isolierung von Protein–virale DNA-Komplexen aus Zellkernen mithilfe der Click-Chemie und der Reinigung mit magnetischen Bäden. Das Protokoll umfasst die Markierung viraler Genome mit alkinmodifizierten Nukleotiden, die Biotinylierung über eine Click-Reaktion und die Bindung an mit Streptavidin beschichtete...

Quelle: Ding, J. et. al., Herstellung von rAAV9 zur Überexpression oder Herunterregulation von Genen in Mausherzen. J. Vis. Exp. (2016)In diesem Video wird die Reinigung rekombinanter Viruspartikel aus transfizierten menschlichen Nierenzellen gezeigt. Das Virus wird durch Gefrier-Tauch-Lyse freigesetzt und mittels Iodixanol-Gradienten unter Verwendung der Blockcopolymer-unterstützten Filtration gereinigt.

Quelle: Rghei, A. D., et al. Herstellung von Adeno-assoziierten Virusvektoren in Zellstapeln für präklinische Studien an großen Tiermodellen. J. Vis. Exp. (2021)Dieses Video demonstriert die Gewinnung eines rohen adeno-assoziierten Virus aus transfizierten Säugerzellen mittels chemischer Lyse und Zentrifugation, wodurch eine AAV-Produktion mit hoher Ausbeute für nachgeschaltete Reinigungsverfahren und präklinische Gentherapie-Anwendungen ermöglicht wird.

Quelle: Lopez Jr., M. A., et al. Nachweis und Entfernung von Nuklease-Kontaminationen während der Reinigung rekombinanter Integrase des Prototyp-Foamy-Virus. J. Vis. Exp. (2017)In diesem Video wird die Reinigung eines polyhistidinmarkierten viralen Integrase mittels Nickelaffinitätschromatographie demonstriert. Das Protokoll verwendet eine Imidazol-Gradientenelution, um das Integrase basierend auf seiner Affinität zum nickelbeladenen Harz gezielt zu isolieren.

Source: Rustad, M. et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the amplification and recovery of infectious bacteriophages from E. coli cultures. It outlines the steps for plaque isolation, phage replication, controlled lysis, and purification.

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Source: Asad, S., et al. Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates antibody-dependent enhancement of Zika virus infection in human primary macrophages, using dengue antibody–virus complexes to model how cross-reactive antibodies facilitate Fcγ receptor–mediated viral entry and replication for studying infection mechanisms and immune interactions.

Source: Klaus, J. P., et al Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates how to measure arenavirus attachment to monkey kidney cells. The assay uses low temperatures to block endocytosis and isolate the virus binding step. The approach enables precise quantification of surface-bound virus particles under conditions that restrict internalization.

Source: Fernández-Fernández, R., et. al. Bacteriophage Removal from Infected Salmonella Cultures. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the use of exogenous LPS (Lipopolysaccharide) as a receptor mimic to inactivate lytic bacteriophages in Salmonella cultures. Through sequential incubation, centrifugation, and washing, phages are eliminated, resulting in a viable, phage-free bacterial suspension for downstream applications.

Quelle: Zhao, J., et al. Kartoffelvirus-X-basierte microRNA-Silenzierung (VbMS) in Kartoffel. J. Vis. Exp. (2020).Dieses Video zeigt die Verwendung von Agrobacterium tumefaciens, um einen auf dem Kartoffelvirus X (PVX) basierenden Konstrukt in im Reagenzglas gezüchteten Kartoffelpflanzen zur virusbasierten microRNA-Silenzierung (VbMS) einzubringen. Die Methode ermöglicht die systemische Unterdrückung einer Ziel-microRNA und erlaubt es Forschern, deren Rolle in der Pflanzenentwicklung anhand...

Quelle: Esposito, A. M.,et al. Hochdurchsatz-Cre-Lox-aktivierter viraler Membranfusionsassay zur Identifizierung von Inhibitoren der HIV-1-viralen Membranfusion. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video demonstriert einen fluoreszenzbasierten Kokultur-Assay zur Überwachung der zell-zu-Zelle-Übertragung von Viren. Der Assay verwendet eine rot-zu-grün Reporterkassette, um die virale Membranfusion sichtbar zu machen und die Wirksamkeit von Testsubstanzen bei der Blockade des viralen Eintritts zu bewerten.

Quelle: Yates, J. G. E., et al. Herstellung eines rekombinanten Newcastle-Krankheitsvirus mit hohem Titer aus Allantoisflüssigkeit. J. Vis. Exp. (2022)Das Video zeigt die Aufreinigung und Konzentrierung von Viruspartikeln aus geklärter Allantoisflüssigkeit, die aus virusinfizierten bebrüteten Hühnereiern gewonnen wurde. Es veranschaulicht eine Reihe von Filtrations- und Trennungsschritten, einschließlich Tiefenfiltration, Querstromfiltration und Dichtegradienten-Ultrazentrifugation, um intakte...

Quelle: Otter, C. J., et al. Infektion primärer nasaler Epithelzellen, die an einer Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche kultiviert werden, zur Charakterisierung der Interaktionen zwischen humanen Coronaviren und dem Wirt. J. Vis. Exp. (2023)Dieses Video zeigt das Wachstum von Coronavirus in menschlichen nasalen Epithelzellen, die an einer Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche kultiviert werden, und ahmt damit die Infektion und virale Replikation in der menschlichen Nasenhöhle nach.

Source: Zhang, L., et al. Immunofluorescent Labeling of Plant Virus and Insect Vector Proteins in Hemipteran Guts. J. Vis. Exp. (2021)The video demonstrates the preparation of gut tissue from a plant virus–infected insect vector for fluorescence imaging. Fixed guts were washed, permeabilized, and incubated with two fluorescent antibodies in a blocking solution—one targeting a viral antigen in vesicles, the other a vesicle-associated membrane protein. The tissue was counterstained for actin...

Source: Schaeffer, J. W., Chandler, et al. Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the detection of viruses from bioaerosols using an anion exchange resin. A liquid impinger containing the resin is used to capture viruses from the air. The resin is collected and treated with a virus lysis buffer containing carrier RNA. The lysate is transferred to a microcentrifuge tube for viral RNA isolation, followed by qRT-PCR to amplify...

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the process of performing a fluorescent plaque assay using recombinant vaccinia virus encoding red fluorescent protein (RFP) in fibroblast cells, followed by plaque isolation and purification for further analysis.

Source: Williams, S. M. et al. Novel Atomic Force Microscopy Based Biopanning for Isolation of Morphology Specific Reagents against TDP-43 Variants in Amyotrophic Lateral Sclerosis. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates tapping-mode AFM to visualize phage–antigen interactions on a mica surface. It outlines the steps for antigen immobilization, phage binding, and high-resolution nanoscale imaging.

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Source: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the processing of lentivirus-transduced mouse intestinal organoids for paraffin embedding, to enable their downstream analysis for assessing gene expression.

Source: Chen, H. et. al. Live Cell Imaging of the TGF-β/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the preparation of luciferase-expressing breast cancer cells using recombinant adenoviruses for in vivo imaging.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Source: Stauffer, S. et al. In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the pH-dependent disassembly of influenza A virus (IAV) cores using gradient ultracentrifugation. It outlines glycerol gradient preparation, ultracentrifugation, and how different pH conditions affect IAV core disassembly.

Source: Philip, A. A., et al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the isolation of rotavirus double-stranded RNA from clarified cell lysates. It further illustrates the separation and visualization of genome segments through polyacrylamide gel electrophoresis.

Source: Philip, A. A., et. al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates a plaque assay technique to monitor rotavirus infection in epithelial cells. Trypsin activation enhances viral entry, and staining highlights viable cells, enabling visualization of infection-induced plaques.

Source: Stauffer, S. et al., In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the effect of pH on the solubilization of influenza A viral cores. Gel electrophoresis and protein staining reveal the progressive disassembly of the core structure under acidic conditions.

Source: Moore, M. D., et al. Alternative In Vitro Methods for the Determination of Viral Capsid Structural Integrity. J. Vis. Exp. (2017)The video demonstrates a protocol for monitoring the heat-induced aggregation of virus-like particles using dynamic light scattering (DLS). It begins with preparing a monodisperse suspension of purified particles. The sample is then loaded into a preheated DLS instrument. As the capsid proteins denature with heat, exposed hydrophobic regions cause particle...

Source: Tran, B. N., et. al. High-throughput Confocal Imaging of Quantum Dot-Conjugated SARS-CoV-2 Spike Trimers to Track Binding and Endocytosis in HEK293T Cells. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the use of quantum dot–conjugated spike protein (QD-Spike) to visualize dose-dependent viral entry in ACE2-GFP–expressing cells. Confocal imaging captures the internalization of QD-Spike via receptor-mediated endocytosis, modeling early coronavirus entry.

Source: Mateer, E., et al., Confocal Imaging of Double-Stranded RNA and Pattern Recognition Receptors in Negative-Sense RNA Virus Infection. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the confocal imaging of viral double-stranded RNA (dsRNA) and cytoplasmic pattern recognition receptors (PRRs) in virus-infected epithelial cells. It highlights how antibody-based fluorescent labeling reveals the interaction between viral replication intermediates and host immune sensors.

Source: Xu, C., et al. An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the phenotyping of EBV-infected T and NK cell lines using flow cytometry, highlighting the preparation, antibody staining, and analysis steps to identify lineage-specific surface markers. It shows how marker profiles confirm distinct T-cell and NK-cell populations.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp.(2015)This video demonstrates the isolation of bacteriophages from a soil sample. A soil sample is collected and suspended in a phage buffer and allowed to settle the sediment. The extract is filtered, and nutrients are added. A vacuum filtration is done to remove microbial contaminants. The filtrate with phages is aliquoted into flasks, and...

Source: Allaire, A., et al. Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus. J. Vis. Exp. (2015).The video demonstrates the procedure for preparing cells to assess the intracellular uptake and activity of an antiviral agent against the hepatitis C virus.

Source: Olety, B., et. al., Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes. J. Vis. Exp. (2016)This study demonstrates a fluorescence-based assay to observe the membrane-binding behavior of human immunodeficiency virus type-1 structural protein. Using synthetic giant unilamellar vesicles as model membranes, the assay visualizes protein recruitment and assembly, mimicking early steps of viral particle formation.

Source: Lê-Bury, G., et al. Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates live confocal imaging of HIV-1-infected human macrophages to visualize and quantify phagosome migration using GFP fluorescence and bright field tracking, providing insights into how HIV alters intracellular trafficking during Fc receptor–mediated phagocytosis.

Quelle: Vacca, O., et al. Verwendung von adeno-assoziierten Viren als Werkzeug zur Untersuchung retinaler Barrieren bei Krankheiten. J. Vis. Exp. (2015)In diesem Video wird das schrittweise Verfahren zur Herstellung von Kryoschnitten der Mausretina zur Visualisierung der Permeabilität von adenoassoziierten Viren über gestörte Retinaschranken hinweg demonstriert.

Quelle: Vacca, O., et al. Adeno-assoziiertes Virus als Werkzeug zur Untersuchung retinaler Barrieren bei Erkrankungen. J. Vis. Exp. (2015).Dieses Video demonstriert die Methode der AAV-vermittelten Genübertragung in der Netzhaut einer transgenen Maus, gefolgt von der Gewebedissektion und Färbung zur Beurteilung der Integrität der inneren Limitansmembran.

Quelle: Moore, M. D., et al. Alternative In-vitro-Methoden zur Bestimmung der strukturellen Integrität viraler Kapside. J. Vis. Exp.(2017).In diesem Video wird gezeigt, wie gereinigte virale Kapside einer Hitzebehandlung unterzogen, vorbereitet und mittels Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) abgebildet werden, um strukturelle Veränderungen und hitzeinduzierte Schäden sichtbar zu machen.

Quelle: Shah, R., et al. Einzelzell-Multiplex-Fluoreszenzbildgebung zur Visualisierung viraler Nukleinsäuren und Proteine sowie zur Überwachung von HIV-, HTLV-, HBV-, HCV-, Zika-Virus- und Influenza-Infektionen. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt die gleichzeitige Visualisierung von HIV-1-DNA, RNA und Kapsidprotein in infizierten menschlichen Lymphozyten mittels verzweigter DNA-Hybridisierung und Immunfluoreszenz, wodurch eine detaillierte Analyse der einzelnen Stadien der Virusreplikation...

Quelle: Pohl, M. O. & Stertz, S. Messung der Bindung und Internalisierung von Influenza-A-Virus in A549-Zellen mittels Durchflusszytometrie. J. Vis. Exp. (2015)In diesem Video wird die Anwendung eines Streptavidin-Blockierungsassays zur Unterscheidung zwischen auf der Oberfläche gebundenem und internalisiertem Influenza-Virus in menschlichen Lungenepithelzellen demonstriert. Der Vergleich der Fluoreszenzsignale zeigt, dass eine höhere Intensität nach der Inkubation auf eine erfolgreiche...

Quelle: Niu, Y. D., et al. Wirksamkeit von Bakteriophagen zur biologischen Bekämpfung lebensmittelbedingter Krankheitserreger, bewertet mittels hochdurchsatzfähiger Methoden. J. Vis. Exp. (2021)In diesem Video wird ein mikroplattenbasiertes Assay zur Beurteilung der lytischen Aktivität von Phagencocktails gegenüber E. coli-Bakterienkulturen demonstriert. Es zeigt auf, wie Änderungen der optischen Dichte die Wirksamkeit der Phagen und die zur vollständigen bakteriellen Hemmung erforderliche...

Quelle: Dembowski, J. A., Deluca, N. A. Reinigung viraler DNA zur Identifizierung assoziierter viraler und zellulärer Proteine. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Infektion von Mammalian-Zellen in der stationären Phase mit HSV-1 (Herpes Simplex Virus-1), gefolgt von der Replikation des viralen Genoms unter Verwendung der Wirt- und Virusreplikationsmaschinerie. Ein synthetisches Nukleosidanalogon wird in die neu synthetisierte virale DNA eingebaut, um replizierende Genome zu markieren,...

Quelle: Hiller, T. et. al. Untersuchung viraler Vektoren in einem dreidimensionalen Lebermodell, das mit der humane hepatzellulären Karzinomzelllinie HepG2 wiederbesiedelt wurde. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die immunhistochemische Färbung zur Beurteilung des viralen Gentransfers in einem rekellularisierten Rattenlebermodell. Die Reporterexpression, bestätigt durch Antikörpernachweis und Ko-Lokalisation mit Kernfärbung, weist auf eine erfolgreiche virale Transduktion in den Zellen hin.

Quelle: Bou Khalil, J. Y., et al. Eine schnelle Strategie zur Isolierung neuer Faustoviren aus Umweltproben unter Verwendung von Vermamoeba vermiformis. J. Vis. Exp. (2016).Dieses Video zeigt die Abbildung von Faustovirus-Partikeln aus einer infizierten Amöbenkultur mittels Transmissionselektronenmikroskopie. Es behandelt die Probenvorbereitung auf dem Gitter, die negative Färbung mit Ammoniummolybdat zur Kontrastverbesserung und die Visualisierung des Virus im Mikroskop. Der Protokollabschnitt...

Quelle: Vallery, T. K. & Steitz, J. A. Quantitative Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) und Immunfluoreszenz (IF) spezifischer Genprodukte in KSHV-infizierten Zellen. J. Vis. Exp. (2019)In diesem Video wird die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung zur Visualisierung viraler RNA in virusinfizierten Zellen demonstriert. Es werden die Schritte der Sondenhybridisierung, Signalverstärkung und konfokalen Bildgebung erläutert.

Quelle: Rghei, A. D., et al. Herstellung von Adeno-assoziierter Virusvektoren in Zellstapeln für präklinische Studien an großen Tiermodellen. J. Vis. Exp. (2021)Das Video demonstriert die Reinigung rekombinanter adenoassozierter Virus-(AAV-)Vektoren aus rohem Wirtszelllysat mithilfe einer Heparin-basierten Affinitätsmatrix. Virale Partikel binden an immobilisiertes Heparin, während Verunreinigungen weggewaschen werden. Ein Puffer mit hohem Salzgehalt löst intakte Viren frei, die in...

Source: Rustad, M., et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the synthesis of bacteriophages using a cell-free transcription–translation (TXTL) system. A master mix is prepared using a bacterial crude extract, an energy mix, an amino acid mix, an inhibitor for a DNA-degrading enzyme, and bacteriophage DNA, then incubated. The in vitro molecular machinery enables viral protein expression and DNA...

Source: Jamieson, T. R., et al. Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the procedure for infecting mammalian cells with green fluorescent protein (GFP)-encoding pseudovirus, monitoring viral replication and spread by fluorescence microscopy, and collecting virus-containing supernatant for downstream applications.

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the expansion of plaque-derived recombinant virus in adherent mammalian cells. The virus carries a fluorescent reporter in place of a virulent gene, enabling infection tracking. Infected cells are harvested for PCR verification of the genetic modification.

Source: Liu, P., et al. Use of a Recombinant Mosquito Densovirus As a Gene Delivery Vector for the Functional Analysis of Genes in Mosquito Larvae. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the process of isolating recombinant Aedes aegypti densovirus (rAaeDV) from infected mosquito-derived epithelial cells. The infected cells are collected and exposed to repeated freeze-thaw cycles for lysis. Lysate is centrifuged, and the supernatant containing viral particles is filtered, aliquoted, and...

Source: Philip, A. A., et al. Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the recovery of recombinant rotavirus by transfecting plasmids encoding viral genome segments into hamster kidney cells, followed by amplification in monkey epithelial cells, enabling studies of rotavirus biology, replication, and vaccine development.

Source: Prasad, M. et al. In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in vitro transformation of murine epithelial cells through viral delivery of Cre recombinase and mutation-inducing components. It outlines the steps for Cas9 activation, cancer-gene modification, and the establishment of a tumorigenic murine cell line.

Source: Ehrke-Schulz, E., et al. Cloning and Large-Scale Production of High-Capacity Adenoviral Vectors Based on the Human Adenovirus Type 5. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the large-scale amplification of high-capacity adenoviral vectors in suspension-adapted human embryonic kidney cells expressing Cre recombinase for use in gene delivery applications requiring high-titer, helper-free vector preparations.

Quelle: Chang, X., et al. Herstellung von pseudotypisierten H5-Vogelgrippeviren mit der Calciumphosphat-Transfektionsmethode und Bestimmung der neutralisierenden Antikörperaktivität. J. Vis. Exp. (2021)Dieses Video demonstriert die Herstellung von Influenza-Pseudoviren in menschlichen Zellen mittels Kalziumphosphat-vermittelter Plasmidtransfektion, wodurch die sichere Erzeugung von Einzyklus-Viruspartikeln für nachgeschaltete Anwendungen wie Antikörperneutralisationsassays unter Bedingungen der...

Quelle: Nishitsuji, H., et al. Entwicklung eines Hepatitis-B-Virus-Reportersystems zur Überwachung der frühen Phasen des Replikationszyklus. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Herstellung und Reinigung rekombinanter Hepatitis-B-Viruspartikel, wodurch sichere, replikationsdefiziente Virensuspensionen für die Untersuchung früher Infektionsereignisse sowie für Hochdurchsatz-Screenings zur Identifizierung antiviraler Wirkstoffe ermöglicht werden.

Quelle: Liu, P., et al. Verwendung eines rekombinanten Mücken-Densovirus als Genübertragungsvektor für die funktionelle Analyse von Genen in Mückenlarven. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Verwendung rekombinanter Mücken-Densoviren, die Mikro-RNAs kodieren, um spezifische Gene in Mückenlarven zu stillen. Infizierte Larven im frühen Entwicklungsstadium produzieren funktionelle Mikro-RNAs, die die Expression von Zielgenen für nachgeschaltete Untersuchungen unterdrücken.

Quelle: Eggers, C. H. Phagevermittelte genetische Manipulation des Lyme-Borrelien-Spirochäten Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).In diesem Video wird die Transduktion genetisch veränderter Borrelia-Spirochäten mithilfe von mit Polyethylenglykol präzipitierten, nicht infektiösen Bakteriophagen, die ein Kanamycin-Resistenzplasmid tragen, demonstriert. Nach der Inkubation mit den Bakterien wird die Kultur auf antibiotikahaltigem Medium ausgestrichen. Nur Zellen, die das Plasmid aufnehmen,...

Quelle: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. Protokoll für die lentivirale Transduktion und nachgeschaltete Analyse von intestinalen Organoiden. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video beschreibt die lentivirale Transduktion von murinen intestinalen Organoiden ausgehend von einer kryptenähnlichen Struktur, die in Suspension vorliegt. Unter Verwendung einer Basalmembran-Matrix als Gerüst und Wachstumsfaktor-supplementiertem Medium werden lentivirale Vektoren eingebracht, um eine stabile Genintegration zu...

Quelle: Chen, H., et al.. Live-Cell-Bildgebung des TGF-β/Smad3-Signaltransduktionsweg in vitro und in vivo unter Verwendung eines Adenovirus-Reportersystems. J. Vis. Exp. (2018).Dieses Video demonstriert eine Methode zur Untersuchung der SMAD-Signalwegaktivierung in Brustkrebszellen mittels dualer adenoviraler Infektion. Ein Virus überträgt ein konstitutiv exprimiertes GFP-Gen, während das andere einen RFP-Reporter unter einem SMAD-sensitiven Promotor trägt. Nach Stimulation mit TGF-Beta werden...

Quelle: Meister, T. L., et al. Ein Zellkulturmodell zur Herstellung von Hepatitis-E-Virus-Stämmen mit hoher Titerkonzentration. J. Vis. Exp. (2020).In diesem Video wird der Prozess der Isolierung von Hepatitis-E-Virus-(HEV-)Partikeln aus transfizierten menschlichen hepatzellulären Karzinomzellen demonstriert. Extrazelluläre Viruspartikel werden aus filtrierten Überständen gewonnen, während intrazelluläre Partikel freigesetzt werden, indem die Zellen wiederholten Gefrier-Tau-Zyklen unterzogen...

Quelle: Rim, Y. A., et al. Generierung induzierter pluripotenter Stammzellen aus Blutzellen mittels Sendai-Virus und Zentrifugation. J. Vis. Exp. (2016).Dieses Video zeigt die Erzeugung induzierter pluripotenter Stammzellen (iPSCs) aus menschlichen peripheren mononukleären Blutzellen mittels Sendai-Virus-vermittelter Reprogrammierung. Die viralen Transkriptionsfaktoren aktivieren Pluripotenznetzwerke und unterdrücken Linien-spezifische Gene, wodurch eine Teilmenge der Zellen...

Quelle: Ehrke-Schulz, E., et al. Klonierung und großtechnische Herstellung von Hochkapazitäts-Adenovirusvektoren basierend auf dem menschlichen Adenovirus Typ 5. J. Vis. Exp. (2016)In diesem Video wird die Reinigung von Hochkapazitäts-Adenovirusvektoren mittels Cäsiumchlorid-Gradienten-Ultrazentrifugation demonstriert, die die Trennung von genomhaltigen Viruspartikeln für Anwendungen in der Genübertragung, Charakterisierung von Vektoren und präklinischen therapeutischen Studien ermöglicht.

Quelle: Lu, A., et al. Virale Transgenexpression in Nagetierherzen und Bewertung des kardialen Arrhythmierisikos. J. Vis. Exp. (2022)Das Video zeigt eine Methode zur Ultraschall-gestützten intramyokardialen Injektion eines rekombinanten viralen Vektors in einem Mausmodell. Diese Technik ermöglicht eine gezielte Gendelivery an das Herz, um die Auswirkungen der Transgenexpression auf die Herzfunktion zu untersuchen.

Quelle: Hiller, T., et al. Untersuchung viraler Vektoren in einem dreidimensionalen Lebermodell, das mit der humanen hepatozellulären Karzinomzelllinie HepG2 wiederbesiedelt wurde. J. Vis. Exp., (2016)Dieses Video zeigt die genvermittelte Übertragung mittels adeno-assoziierter Viren in einem humanisierten Rattenleber-Gerüst. Der Vektor überträgt ein Transgen, das einen fluoreszierenden Reporter und RNA zur Genstilllegung kodiert, mittels rezeptorvermittelter Endozytose in Leberzellen. Dieses...

Quelle: Kubala, M. H. & DeClerck, Y. A. Bedingte Herunterregulation der Genexpression in Krebszelllinien zur Untersuchung der Rekrutierung von Monozyten/Makrophagen in das Tumormikroumfeld. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video demonstriert die Erzeugung bedingter Knockdown-Krebszelllinien unter Verwendung eines Tet-induzierbaren lentiviralen shRNA-Systems. Es erläutert die Schritte für die virale Transduktion, die antibiotische Selektion und die durch Doxycyclin induzierte Gen-Silenzierung.

Quelle: Ding, J., et al. Herstellung von rAAV9 zur Überexpression oder Genabschaltung in Mausherzen. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die Herstellung rekombinanter adeno-assoziierter Viruspartikel mittels Plasmid-Transfektion in Säugetierzellen. Es verdeutlicht die koordinierte Expression der Rep-, Cap- und Hilfsproteine, die die virale Genomreplikation und die Kapsid-Assembly im Zellkern antreiben.

Quelle: McAllister, S. C., Hanson, R. S., et al. Ein In-vitro-Modell zur Untersuchung der zellulären Transformation durch das Kaposi-Sarkom-Herpesvirus. J. Vis. Exp.(2017)Dieses Video demonstriert die retrovirale Transduktion primärer endothelialer Zellen mit den HPV16-E6/E7-Onkogenen. Die integrierten Onkogene inaktivieren die Tumorsuppressoren p53 und Rb und verlängern dadurch die Zelllebensdauer. Die G418-Selektion bereichert transduzierte Zellen und ergibt immortalisierte endotheliale...

Quelle: Koza, P., et al. Erzeugung transgener Ratten mittels eines lentiviralen Vektoransatzes. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video demonstriert die mikroinjektionsgestützte Applikation von lentiviralen Vektoren in befruchtete Rattenembryonen zur Erzielung stabiler Transgenintegration für die Erzeugung transgener Ratten.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates a luciferase-based pseudovirus titration assay to determine the optimal target cell density for maximum infection. By comparing luminescence across cell densities, the method ensures high assay sensitivity and reproducibility for downstream applications.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates a luciferase-based assay to quantify pseudovirus infection in epithelial cells. The pseudovirus encodes the luciferase gene, which is expressed in infected cells. After washing, and cells are incubated with lysis buffer at an ultra-low temperature, and then thawed to induce lysis.

Source: Klaus, J. P. et al. Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the extraction of viral RNA from surface-bound virions on epithelial cells using silica spin columns. The method includes chemical lysis, RNA stabilization, and membrane-based purification for downstream quantification of virus-cell attachment.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates the procedure for quantifying Hepatitis C viral RNA using quantitative reverse transcription PCR to measure viral load in infected cell cultures.

Source: Kadoya, S., Sano, D. Assays for the Specific Growth Rate and Cell-binding Ability of Rotavirus. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates the use of a plaque assay to assess the rotavirus growth curve. The method involves infecting host cells with diluted virus, overlaying with agarose to restrict spread, and staining to visualize plaques formed by viral replication. By counting plaque-forming units at defined time points, the resulting growth curve reveals the lag, exponential, and...

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Source: Scarborough, R. J., et al. Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates a reverse transcriptase (RT) assay to assess the effect of a test RNA on virus-like particle (VLP) production. Cells are co-transfected with plasmids, and RT activity is measured as a quantitative indicator of VLP output. A decrease in RT activity reflects suppression of viral gene expression by the test RNA.

Source: Manocheewa, S., et al. Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses. J. Vis. Exp. (2015)The video demonstrates the procedure for a growth competition assay to measure the relative replication fitness of two viral strains by comparing their replication in human immune cells.

Quelle: Vijayraghavan, S., et al. Protokoll zur Herstellung integrase-defizienter lentiviraler Vektoren für das gezielte Ausschalten von Genen mittels CRISPR/Cas9 in teilenden Zellen. J. Vis. Exp. (2017).Dieses Video demonstriert die Verwendung eines p24-ELISA zur Abschätzung der viralen Titer von lentiviralen Vektoren. Der Test beinhaltet das Lyse von Viruspartikeln, um p24 freizusetzen, die Bindung mittels spezifischer Antikörper und den Nachweis über ein mit Peroxidase gekoppeltes System,...

Quelle: Krishnamurthi, R., et al. Untersuchung der Auswirkungen von temperenten Bakteriophagen auf ihre Lysogene mittels Transkriptomik. J. Vis. Exp. (2024).Dieses Video demonstriert die zeitliche Zählung spontaner Phageninduktion in lysogenem Pseudomonas aeruginosa, indem lebensfähige Bakterienzellen (KBE) und infektiöse Phagenpartikel (Plaque-bildende Einheiten, PBE) über die Zeit quantifiziert werden. Durch die Entnahme von Proben zu definierten Zeitpunkten während des Wachstums sowie die...

Source: Frias-De-Diego and A., Crisci, E. Use of Crystal Violet to Improve Visual Cytopathic Effect-based Reading for Viral Titration using TCID50 Assays. J. Vis. Exp., (2022)This video demonstrates a crystal violet staining method to visualize cytopathic effects in virus-infected cell cultures. The pattern of stained and unstained wells across serial dilutions enables rapid, cost-effective estimation of the viral infectious dose.