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1. Vorrichtung
Bei allen Tests wird eine weiche Unterlage an der Basis der Vorrichtung platziert, um alle Mäuse, die herunterfallen abzufedern. NB Dies wird in den Figuren nicht gezeigt ist, um nicht auf einen Teil der Vorrichtung zu verschleiern. Während des Tests von Hunderten von Mäusen, sowohl normalen und mutierten, haben wir noch nie Verletzungen durch herabfallende von einer solchen Vorrichtung, die typischerweise 30-50 cm hoch verursacht beobachtet. Auch sicher sein, zu reinigen und zu sterilisieren die Geräte zwischen jeder Maus getestet.
1.1 Rotarod
Es gibt einige kommerzielle Versionen von diesem Gerät auf dem Markt, aber einige Nachteile, wie zum Beispiel das Überfahren einer angemessenen Geschwindigkeit zu beschleunigen, um Motor Koordinationsstörungen (anstatt Ausdauer) zu erkennen. Ein weiterer typischer Fehler ist, dass die Stange nicht hoch genug über dem Boden, die sich in Mäusen tendenziell fallen oder abspringt.
Die RotaRod in 1 gezeigt ist, wurde auf das Design gemachtdes Autors durch den technischen Abschnitten der Abteilung für Pharmakologie, Universität Oxford. Die Stange 3 cm Durchmesser, 30 cm über dem Boden der Vorrichtung unterstützt. Die Oberfläche ist in einer Reihe von parallelen Rippen entlang der Längsachse gerändelt, so dass die Mäuse um es effektiv zu greifen (Abbildung 2). NB Die Tiefe der Rippen ist ein lebenswichtiges Detail; wenn die Maus nicht bekommen kann einen guten Halt der Test wird sehr viel schwerer, auf der anderen Seite, wenn der Griff ist zu gut, die Maus "Wagenrad" um den Stab herum passiv halten auf sie. Für "amateur Rotarod Macher" kann es nützlich sein zu wissen, dass gerändelte hölzernen Dübeln in angemessener Höhe für Mäuse im Handel erhältlich ist, wäre es natürlich brauchen, um mit einem guten wasserdichten Lack vor Gebrauch behandelt werden. Die Startgeschwindigkeit ist auf 4 Umdrehungen pro Minute, die Beschleunigung auf 20 U / min eingestellt. Die Höchstgeschwindigkeit liegt bei 40 Umdrehungen pro Minute.
Zwei Flansche verhindern, dass die Maus am Verlassen der Stange. Sie sind 30 cm im Durchmesser (dieskönnte wahrscheinlich bis 20 cm reduziert werden.) Ihre Trennung ist bei 6 cm (maximal) eingestellt müssen aber möglicherweise kleiner für Sub-erwachsenen Mäusen angepasst werden, wenn sie sich umdrehen auf der Stange neigen.
1.2 Dreibettzimmer horizontalen Balken (Abbildung 3)
Die Stäbe sind aus Messing, 38 cm lang, 49 cm gehalten über der Tischfläche durch eine hölzerne Stützpfeiler an jedem Ende. Die Säulen sind mit einem schweren hölzernen Basis befestigt. Drei bar Durchmesser stehen zur Verfügung: 2, 4 und 6 mm. Die 2 mm bar ist der Standard, den wir verwenden, aber viele Mäuse erreichen maximale Punktzahl zu diesem Thema. Daher größeren Durchmesser Stäbe wurden in einem Versuch, um den Test zu suchen, wie Mäuse können diese nicht so gut greifen aufgenommen.
1.3 Statische Stangen
Fünf hölzerne Dübel oder Stäbe unterschiedlicher Dicke (35 (1 Stange), 28, 22, 15 und 9 (Stange 5) mm Durchmesser), die jeweils 60 cm lang werden von einem G-Klemme an ein Labor Regal, so dass die Stangen ragen horizontal fixiert in den Raum (Abbildung 4). Das Endevon der Stange in der Nähe der Bank eine Markierung 10 cm vom Ende, um die Ziellinie zu bezeichnen. Die Höhe der Stäbe über dem Boden beträgt 60 cm.
Wenn eine kürzere und weniger ausführlichen Test erforderlich ist, verwenden nur die größten, kleinsten und mittleren Stangen. Van Dellen et al. 14 verwendet nur eine einzige Stange, um den Fortschritt der Huntington-Krankheit bei Mäusen zu bewerten.
1.4 Barren
Zwei parallele Stahlstäbe 1 m in der Länge und 4 mm Durchmesser 30 mm (auf ihre Zentren) abgesehen von hölzernen Stützpfeiler an ihren Enden (Abbildung 5) fixiert. Die Bars sind 60 cm über dem Boden.
2. Vorgehensweise
Bei allen Tests bringen Mäuse der experimentellen Raum 5-20 min vor der Prüfung, um sicherzustellen, dass sie vollständig wach. Als allgemeine Regel gilt, zur Erholung der Muskelkraft und eine Rückkehr auf ein normales Niveau der Erregung zu ermöglichen, ruhen die Mäuse durch eine Rückkehr zu den eigenen Käfig nach jedem Motor Test.
2.1 Rotarod
Stellen Sie die Rotarod mit einem Start-Geschwindigkeit von 4 min, Beschleunigung 20 U / min. Halten Sie die Maus am Schwanz, und legen Sie sie auf der rotierenden Stange abgewandten der Drehrichtung so dass es nach vorne zu gehen, um aufrecht zu bleiben hat. Dies ist am einfachsten zu tun, wenn die Maus nach oben in Richtung der Stange in einem Winkel von 45 ° unter der Horizontalen gebracht; versuchen, die Maus von oben senken wird es breitet seine Hinterbeine und das Greifen der Kanten der Flansche führen. Schnell lassen Sie die Maustaste los, wenn es fast berührt die Stange, nur nach vorne und oberhalb der Stäbe oberen Totpunkt, so dass es leicht zu greifen die Stange. A (wahrscheinlich einfacher und zuverlässiger Technik) ist eine dünne (10-15 mm) Dübel verwenden. Die Maus mit einer Hand, senken sie an dem Dübel, parallel zu der langen Achse. Der Dübel wird mit der Maus den Kopf nach unten um 30 °, um ihm mehr Zeit, um die Rotarod greifen, sobald es losgelassen wird abgewinkelt. Senken Sie die Maus und Dübel zwischen the Flansche des Rotarod und einmal über den rotierenden Stab die ziehen die Dübel nach unten weg von der Maus, welche die Stange zu erfassen und zu Fuß nach vorne.
Bei 10 sec nachdem man mit der Maus auf der Stange, starten Beschleunigung (solange die Maus nach vorne weist: wenn nicht, warten, bis es vorne Gesicht tut, bevor Beschleunigung), und notieren Sie die Geschwindigkeit, mit der die Maus fällt. Wenn sie abfällt vor 10 sec, notieren Sie die Zeit von Herbst und versuchen Sie es erneut, bis zu drei Mal in der Gesamtmenge, die Aufzeichnung der Geschwindigkeit bei der ersten Herbst nach 10 sec Punkt. Allerdings fällt vor 5 sec, die aufgrund der schlechten Platzierung vom Versuchsleiter sind, sollten nicht aufgenommen werden. Die mittlere Geschwindigkeit im Herbst ist der Bezugspunkt, anstatt die maximale Geschwindigkeit, korrigiert dies für die zusätzliche Übung erhält die Maus während der gescheiterten Läufe, die es angenommen würde Performance unterstützen wird. So eine Maus, die vor 10 Sek. fällt einmal, dann bleibt bis 12 rpm zweiten Mal Partituren (4 +12) / 2 = 8 min. Eine Maus fällt dann zweimalAufenthalt auf 10 rpm Partituren (4 +4 +10) / 3 = 6 min. Wenn eine Maus nicht zu greifen in 10 sec dreimal weisen Sie ihm einen Wert von 4 min.
Ein Problem ist, dass Mäuse manchmal aufhören zu Fuß nach vorne und greifen die Stange fest statt, so dass sie passiv Salto Runde, obwohl die meisten schließlich abfallen. Es könnte daher nützlich sein, beachten Sie auch die Geschwindigkeit, wenn der erste derartige Inversion auftritt. Eine mögliche Lösung könnte darin bestehen, eine Stange mit einem größeren Durchmesser oder weniger ausgeprägte Grate zu verwenden.
2.2 Horizontale Balken
Wie Mäuse es am einfachsten zu finden, um die schmale 2 mm bar zu erfassen, ist es ratsam, sie vorher zu testen auf diese ein. Halten Sie die Maus am Schwanz, legen Sie sie auf der Bank vor dem Gerät und schieben Sie sie schnell nach hinten ca. 20 cm (dies richtet sie senkrecht zur Stange), schnell zu erhöhen und lassen Sie es zu erfassen die horizontale Leiste am zentralen Punkt mit seine Vorderpfoten nur, und lassen Sie den Schwanz, gleichzeitig Start der Stoppuhr. Diese ceine schwer zu effizient zu erreichen, einige Mäuse Grip besser, wenn der Schwanz plötzlich freigesetzt wird, und wenn sie sie noch unterstützt fühlen können sie zu greifen scheitern. Das Kriterium Punkt ist entweder ein Fall aus der Bar, bevor die Maus erreicht eine der Säulen des Ende der Bar, oder die Zeit bis eine Vorderpfote berührt eine Spalte. Maximale Testzeit (cut-off Zeit) beträgt 30 Sekunden.
Wenn die Maus nicht die Bar richtig zu erfassen ersten Mal und dies scheint darauf zurückzuführen sein, der Experimentator die Technik, statt der Maus, es erneut zu versuchen (nach einer kurzen Pause, während noch ein oder zwei Mäusen getestet werden) und nicht aufzeichnen in diesem Herbst. Wenn die Maus fällt vor 5 sec und das ist offenbar nicht aufgrund der schlechten Platzierung durch den Experimentator, wiederholen Sie bis zu dreimal in einem Versuch, eine> 5 sec Punktzahl zu bekommen. Wenn> 5 sec auf den zweiten Versuch, tu das nicht eine dritte Studie. Nehmen Sie das beste Ergebnis als Bezugspunkt. Eine Maus, die wiederholt nicht selbst für> 5 sec Partituren nur 1 unterstützt.
Wenn das Triple-bar-Version verwendet wird, wenn die Maus Partituren 5 an diesem ersten 2 mm bar kann es dann auf dickere Stäbe getestet werden, nach einer kurzen Ruhepause, während noch ein oder zwei Mäusen getestet werden. Das Scoring-System für die 4 und 6 mm Bars ist die gleiche wie für die 2 mm-Bar, und das Endergebnis ist die kumulierte Gesamtsumme. So eine Maus, die Partituren 5 auf der 2 mm bar fällt aber aus dem 4 mm bar nach 13 sec Partituren 5 +3 = 8.
2.2.1
Punkten die horizontalen Balken: die ersten beiden Intervalle sind weniger als die letzten beiden, wie einst die Mäuse haben zunächst die Aufgabe, sie sind weniger wahrscheinlich zu fallen gemeistert:
Fallen zwischen 1-5 sec = 1
Fallen zwischen 6-10 sec = 2
Fallen zwischen 11-20 sec = 3
Fallen zwischen 21-30 sec = 4
Fallen nach 30 sec = 5
Platzieren einer Vorderpfote auf einen Balken Unterstützung, ohne zu fallen = 5
NB als optionale Verwendung von 4 und 6 mm Bars ist eine neue Ergänzung zu unserem Protokoll haben wir noch nicht über umfangreicheErfahrung mit ihnen.
2.3 Statische Stangen
Platzieren Sie die Maus am anderen Ende der breitesten Stange (Nasenspitze eines Kopfes Länge vom Ende ist ideal). Nehmen Sie zwei Maßnahmen: Orientierung (Zeit genommen, um 180 ° von der Ausgangsposition in Richtung Regal orientieren) und Laufzeit (die Zeit genommen, um dem Regal Ende (Nase jenseits der 10 cm-Marke aus dem Regal Ende der Stange) reisen.
Ausrichtung ist abhängig von der Maus bleiben aufrecht, wenn sie auf den Kopf dreht sich um und klammert sich unter der Stange, beliebig zuweisen (für statistische Zwecke) die maximale Punktzahl von 120 Orientierung sec. Nicht testen Sie es auf kleinere Stäbe, auch die Laufzeit wird der maximale Wert wie eine Maus, die aufrecht Transite ist offensichtlich besser als eine, die während hängen kopfüber Transite koordiniert.
Wenn nach dem Orientieren, fällt die Maus oder erreicht die maximale Testzeit (willkürlich auf 120 s eingestellt) nicht testen es auf sKleine Stangen. Für statistische Zwecke werden zuordnen Mäuse fallen 120 für die jeweilige Stange und für nachfolgende diejenigen zugewiesen, wie es angenommen wird, sie würden wieder von einem engeren Stab fallen. Wenn die Maus auf den Kopf stellt, beachten Sie auch dieses Ereignis, für eine erfolgreiche Transit sowie Orientierung muss aufrecht bleiben auf der Stange. Ansonsten weisen Sie die maximale Punktzahl. Entfernen Sie die Maus, nachdem es das Ende der Stange oder fällt erreicht.
Nach der Prüfung auf einer Stange zurück die Maus an die eigenen Käfig, um sich auszuruhen, während Sie eine andere Maus zu testen. Dann legen Sie es auf die nächst kleinere Größe Stange und testen Sie es auf die gleiche Weise wieder. Stoppen Sie die Prüfung, ob die Maus fällt eine Stange, nachdem er auf es für mehr als 5 Sekunden. Wenn es fiel in weniger als 5 Sekunden zu ersetzen und damit einen weiteren Versuch (als unter 5 sec könnte aufgrund einer fehlerhaften Platzierung vom Experimentator), für maximal drei Versuche, und verwenden Sie das beste Ergebnis.
2.4 Barren
Platzieren Sie die Maus in ter Mitte der beiden Stangen mit ihrer Längsachse senkrecht zu derjenigen der Stangen; beide Vorderpfoten sollte auf eine bar, beide Hinterpfoten der anderen Schiene. Scoring ist ähnlich wie bei der statischen Stäbe. Nehmen Sie zwei Maßnahmen: die Zeit, bis die Maus orientiert 90 ° in die Startposition, und die Zeit bis zum Erreichen anschließend eine der Ende unterstützt. Wenn die Maus auf den Kopf stellt, beachten Sie auch dieses Ereignis. Wie für den statischen Test Stangen, Orientierung und Transit ohne es Umdrehen erreicht werden müssen, da sonst die maximale Zeit zugeteilt wird. Es ist selten, einigermaßen gesunden Mäusen in weniger als 5 Sekunden fallen, wenn dies geschehen ist es wahrscheinlich aufgrund der schlechten Platzierung. Deshalb verwerfen das Ergebnis und testen Sie die Maus.