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Die Rolle der zellulären Mikroumgebung ist entscheidend bei der Bestimmung Zellschicksals und Funktion in nahezu allen Säugetiergewebe von der Entwicklung zur malignen Transformation anerkannt. Insbesondere hat die Interaktion mit benachbarten Stroma in einer Vielzahl von biologischen Phänomenen in Verbindung gebracht, jedoch begrenzen konventionellen Techniken die Möglichkeit, die räumlichen und dynamischen Elementen solcher Wechselwirkungen zu verhören.
In Mikromechanische Reconfigurable Kultur (RC), beschäftigen wir eine mikromechanische Silizium-Substrat mit beweglichen Teilen zur dynamischen Steuerung von Zell-Zell-Interaktionen durch mechanische Neupositionierung. Bisher wurde diese Methode angewendet, um interzelluläre Kommunikation in Co-Kulturen von Hepatozyten und Nicht-Parenchym-Zellen zu untersuchen, zeigen zeitabhängige Wechselwirkungen und eine begrenzte Reichweite für lösliche Signalisierung 1.
Hier beschreiben wir im Detail die Herstellung und Verwendung der RC-System. Wir beginnen mit der Demonstration der Handhabung des Gerätes Teile mit einer Pinzette, einschließlich Betätigung zwischen dem Spalt und Kontakt-Konfigurationen (Zellpopulationen durch einen schmalen 80-um Spalt getrennt, oder in direkten engen Kontakt). Als nächstes haben wir ausführlich den Prozess der Vorbereitung der Substrate für die Kultur und die multi-step Zellaussaat Verfahren zur Gewinnung von konfluenten Zellrasen erforderlich. Mit Live-Mikroskopie, wir dann zeigen, Echtzeit-Manipulation von Zellen zwischen den verschiedenen möglichen experimentellen Konfigurationen. Schließlich zeigen wir die Schritte, die erforderlich sind, um die Oberfläche der Vorrichtung für die Wiederverwendung zu regenerieren: Toluol und Piranha Reinigung, Polystyrol-Beschichtung und Sauerstoff-Plasma-Behandlung.