Methodenartikel

Entparaffinisierung und Rehydrierung von Gewebeschnitten: ein zweistufiges Verfahren zur Entfernung von Paraffinwachs aus FFPE-Gewebeschnitten mit anschließender Geweberehydrierung

30. April 2023

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Sugimoto, K. et al. Genomweite Analyse der DNA-Methylierung bei Magen-Darm-Krebs. J. Vis. Exp. (2020)

In diesem Video demonstrieren wir die Verarbeitung von FFPE- oder formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Schnitten, die aus gastrointestinalem Tumorgewebe gewonnen wurden. Die Entparaffinierungs- und Rehydratisierungsschritte ermöglichen die Aufbereitung der Gewebeprobe für nachfolgende analytische Anwendungen.

Protokoll

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für menschliches Wohlergehen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Waschen der Objektträger

  1. Bereiten Sie 10 μm ungefärbte formalinfixierte, in Paraffin eingebettete (FFPE) Schnitte vor.
  2. Legen Sie Objektträger in einen Objektträgerhalter aus Glas: Verwenden Sie etwa 3-5 Objektträger mit dem größten Querschnitt, es sei denn, das Gewebe ist minimal und es werden mehr Objektträger benötigt.
  3. Füllen Sie den Objektträgerhalter mit Xylol und stellen Sie sicher, dass das gesamte Gewebe auf dem Objektträger untergetaucht ist. 15 Min. ziehen lassen.
  4. Gießen Sie nach 15 Minuten das Xylol mit den Objektträgern aus, die mit einer Pipettenspitze gehalten werden, damit die Objektträger nicht herausfallen.
  5. Gießen Sie mehr Xylol auf die gleiche Stufe wie zuvor ein. Weitere 15 Minuten ziehen lassen.
  6. Nach 15 min das Xylol erneut ausgießen.
  7. Füllen Sie den Objektträgerhalter mit 100 % Ethanol (EtOH) und stellen Sie sicher, dass das gesamte Gewebe auf dem Objektträger vollständig untergetaucht ist. 3 Min. ziehen lassen.
  8. Gießen Sie das EtOH ab, während Sie die Objektträger vorsichtig festhalten. Füllen Sie auf das gleiche Niveau mit mehr EtOH auf. 2 Min. ziehen lassen.
  9. Gießen Sie das EtOH wieder ab und entfernen Sie den Objektträger. Legen Sie sie zum Trocknen vorsichtig mit der Vorderseite nach oben auf ein sauberes Papiertuch. 10 Min. ziehen lassen.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Xylol Sigma-Aldrich214736
100% Ethanol Sigma-AldrichArtikel-Nr.: 24194

Nachdrucke und Genehmigungen

Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden

Genehmigung beantragen

Schlagwörter

DeparaffinizationRehydrationFFPE TissueXylene TreatmentEthanol GradientTissue SectioningHistological PreparationParaffin RemovalTissue ProcessingSlide Holder

Verwandte Artikel