Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für menschliches Wohlergehen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.
>1. Färben
- Bevor Sie mit dem Färben fortfahren, wischen Sie überschüssige Lösungen um das Gewebe auf dem Objektträger mit Seidenpapier ab.
- Stellen Sie die Objektträger bei Raumtemperatur und Luftfeuchtigkeit auf, um ein Austrocknen des Gewebes auf dem Objektträger während des gesamten Färbeprozesses zu vermeiden.
- Oxidieren Sie die Objektträger 5 Minuten lang mit ein paar Tropfen Kaliumpermanganat. Stellen Sie sicher, dass das Volumen an Kaliumpermanganat ausreicht, um den Gewebeabschnitt auf jedem Objektträger zu bedecken.
- Spülen Sie die oxidierten Objektträger mit destilliertem Wasser in einem Coplin-Glas mit 2-3 Wechseln ab. Beobachte die blaue Farbe des Gewebes.
- Bleichen Sie nun diese Objektträger, indem Sie einige Tropfen Oxalsäure für 5 Minuten hinzufügen. Stellen Sie sicher, dass das Volumen der Oxalsäure ausreicht, um den Gewebeabschnitt auf jedem Objektträger vollständig zu bedecken.
- Spülen Sie die Objektträger ab, indem Sie sie in das mit destilliertem Wasser gefüllte Coplin-Glas tauchen. Führen Sie die Spülung 2x-3x durch.
- Waschen Sie nun diese Objektträger kurz in 95%igem Alkohol und tauchen Sie die Objektträger dann für 8-24 h.
in eine Elastinlösung (5 g/L)
Anmerkung: Elastinlösung ist flüchtig und ihre Färbezeit ist relativ lang, daher ist es am besten, die Objektträger mit elastischer Färbung in einen versiegelten Behälter zu tauchen, z. B. eine transparente Glasflasche mit einer Verschlusskappe. Das Fassungsvermögen des Behälters und das Volumen der Elastinlösung hängen von der Anzahl der eingetauchten Objektträger ab, sofern dies das vollständige Eintauchen aller Objektträger ermöglicht.
- Tauchen Sie diese Objektträger 1-2 Minuten lang direkt in 95%iges Ethanol, um jeden Gewebeschnitt gut zu differenzieren.
Anmerkung: Unter Differenzierung versteht man die Änderung der Ladung des Gewebeabschnitts, wodurch die überschüssige Färbung, die vom Gewebe aufgenommen wird, entfernt und die Farben klarer werden. Nach der Färbung der Elastinlösung sollten die Proben nicht mit destilliertem Wasser gewaschen werden, um Schwierigkeiten bei der Unterscheidung zu vermeiden. Bei Bedarf mikroskopisch auf blau-schwarze elastische Fasern und grauen Hintergrund prüfen. Es ist besser, das Gewebe etwas zu unterdifferenzieren, da die nachfolgende Van Gieson-Gegenfärbung den elastischen Fleck auch etwas herausziehen kann.
- Spülen Sie diese Objektträger nach der Differenzierung vollständig mit destilliertem Wasser ab.
Die - Objektträger in der Van Gieson'schen Lösung für 1 Min.
gegenfärben
Anmerkung: Das Volumen der Van Gieson-Lösung muss ausreichend sein, um den Gewebeschnitt auf jedem Objektträger vollständig eintauchen zu können.
