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>1. Aufspalten von SBNET-Sphäroiden
HINWEIS: Dies geschieht zur Erweiterung und zum Teilen mit anderen Forschern.
- Verwenden Sie eine P1000-Pipette, um das ECM mechanisch zu brechen, und aspirieren Sie das ECM mit SBNET-Sphäroiden in ein steriles 1,5-ml-Röhrchen.
Bei - 1.000 x g bei 4 °C zentrifugieren, den gesamten Überstand entfernen und das Röhrchen auf Eis stellen.
- Geben Sie das 2-4-fache Volumen des neuen ECM in das Pellet. Mischen Sie das neue ECM mit den alten ECM- und SBNET-Sphäroiden, indem Sie 10x auf und ab pipettieren, um das Einbringen von Luftblasen zu vermeiden.
- 5-20 μl des ECM- und SBNET-Sphäroidgemisches auf eine neue Platte übertragen und die ECM verfestigen lassen.
- Mit dem neuen SBNET-Medium bedecken und in den Inkubator umfüllen. Die Wiederfindungsrate liegt bei etwa 95 % bis 100 %.
- Um SBNET-Sphäroide an ein anderes Labor zu versenden, übertragen Sie SBNET-Sphäroide mit neuem ECM in einen T25-Kolben und lassen Sie ECM erstarren.
- Füllen Sie den T25-Kolben mit SBNET-Sphäroidmedium, schrauben Sie den Verschluss fest auf und bereiten Sie die Versandverpackung vor.
- Entfernen Sie nach Erhalt einer SBNET-Sphäroidkultur das Kulturmedium und führen Sie die Schritte 1.1 bis 1.5 aus, um die SBNET-Sphäroide wieder in die Kultur zu versetzen.