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Schnittbildung, Färbung und TEM-Bildgebung von eingebetteten Exosomen: Ein Protokoll zur Visualisierung der strukturellen Merkmale von Exosomen mit TEM

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Jung, M. K. et al. Probenvorbereitung und Bildgebung von Exosomen mittels Transmissionselektronenmikroskopie. J. Vis. exp. (2018)

Dieses Video beschreibt die Technik zur Herstellung eines Dünnschnitts von eingebetteten Exosomen. Diese Schnitte können ferner mit Hilfe der Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) gefärbt und abgebildet werden, um die strukturellen Merkmale von Exosomen zu untersuchen.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Schnitte der Exosomen

  1. Bereiten Sie den Exosomenblock vor, indem Sie die gereinigte Exosomenprobe (die aus dem Kulturüberstand von HCT116-Zellen gewonnen wurde) in eine reine Einbettmischung mit niedriger Viskosität einbetten.
  2. Der Exosomenblock mit einer Dicke von 60 nm wird durch ein Ultramikrotom geschnitten.
  3. Doppelfärbung mit 2% Uranylacetat für 20 min und Bleicitrat für 10 min.
    Für Reynolds-Bleilösung fügen Sie 1,33 g Bleinitrat und 1,76 g Natriumcitrat zu insgesamt 50 ml destilliertem Wasser hinzu.
  4. Betrachten Sie das Gitter unter Transmissionselektronenmikroskopie bei 80 kV.
  5. Klicken Sie....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ultra-MikrotomLeicaUCT (Englisch)
UranylacetatemsArtikel-Nr.: 22400Gefährliche Chemikalie
BleicitratemsNr.: 17900
TransmissionselektronenmikroskopieHitachiNr. H7600
Nickel-GitteremsG200-Ni
Kupfer-GitteremsG200-Cu
TransmissionselektronenmikroskopieJEOLJEM2200FS

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Tags

Exosome SectioningTransmission Electron MicroscopyUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingUltra microtome SectioningNickel Grid PreparationExosome Imaging ProtocolExosome Structural AnalysisTEM Sample PreparationExosome Visualization

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