Schnittbildung, Färbung und TEM-Bildgebung von eingebetteten Exosomen: Ein Protokoll zur Visualisierung der strukturellen Merkmale von Exosomen mit TEM

Zusammenfassung

Quelle: Jung, M. K. et al. Probenvorbereitung und Bildgebung von Exosomen mittels Transmissionselektronenmikroskopie. J. Vis. exp. (2018)

Dieses Video beschreibt die Technik zur Herstellung eines Dünnschnitts von eingebetteten Exosomen. Diese Schnitte können ferner mit Hilfe der Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) gefärbt und abgebildet werden, um die strukturellen Merkmale von Exosomen zu untersuchen.

Protokoll

>1. Schnitte der Exosomen

1. Bereiten Sie den Exosomenblock vor, indem Sie die gereinigte Exosomenprobe (die aus dem Kulturüberstand von HCT116-Zellen gewonnen wurde) in eine reine Einbettmischung mit niedriger Viskosität einbetten.
2. Der Exosomenblock mit einer Dicke von 60 nm wird durch ein Ultramikrotom geschnitten.
3. Doppelfärbung mit 2% Uranylacetat für 20 min und Bleicitrat für 10 min.
   Für Reynolds-Bleilösung fügen Sie 1,33 g Bleinitrat und 1,76 g Natriumcitrat zu insgesamt 50 ml destilliertem Wasser hinzu.
4. Betrachten Sie das Gitter unter Transmissionselektronenmikroskopie bei 80 kV.
5. Klicken Sie auf "Erfassen" und dann auf "Datei" und dann auf "Speichern unter" im CCD-Kamerasystem unter dem Elektronenmikroskop bei 80 kV. Befolgen Sie die automatischen Einstellungen für die Belichtungszeit.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ultra-Mikrotom	Leica	UCT (Englisch)
Uranylacetat	ems	Artikel-Nr.: 22400	Gefährliche Chemikalie
Bleicitrat	ems	Nr.: 17900
Transmissionselektronenmikroskopie	Hitachi	Nr. H7600
Nickel-Gitter	ems	G200-Ni
Kupfer-Gitter	ems	G200-Cu
Transmissionselektronenmikroskopie	JEOL	JEM2200FS