Methodenartikel

Negative Färbung von gereinigten Exosomen: Ein Verfahren zur Visualisierung der Exosomenmorphologie mittels Transmissionselektronenmikroskopie

30. April 2023

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Jung, M. K. et al. Probenvorbereitung und Bildgebung von Exosomen durch Transmissionselektronenmikroskopie. J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video beschreibt ein Verfahren zur negativen Färbung von gereinigten Exosomen. Die negativ gefärbten Exosomen werden mittels Transmissionselektronenmikroskopie abgebildet. Diese Technik hilft, die Morphologie von Exosomen sichtbar zu machen.

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Negative Färbung

  1. Glimmentladung der dünnen, mit Formvar/Carbon-Film beschichteten 200-Mesh-Kupfer-EM-Gitter für 1 min durch Glimmentlader.
  2. Fixieren Sie gereinigte Exosomen mit 1 mL 2 % Paraformaldehyd (PFA) für 5 min.
    HINWEIS: Paraformaldehyd-Dämpfe sind giftig. Alle Arbeiten sollten in einem belüfteten Abzug erledigt werden.
  3. Laden Sie 5-7 μl Exosom-Suspensionslösung auf das Gitter und inkubieren Sie für 1 min. Wenn die Konzentration des Exosoms zu hoch ist, verdünnen Sie die Konzentration auf die Hälfte bis ein Fünftel.
  4. Färben Sie sofort mit den ~20 Tropfen gefilterter 1%iger Uranylacetat (UA)-Lösung mit einer Spritze auf die Oberfläche des EM-Gitters.
  5. Entfernen Sie die überschüssige UA-Lösung auf dem Gitter, indem Sie den Gitterrand mit Filterpapier berühren.
  6. Spülen Sie den Rost schnell mit einem Tropfen Wasser ab. Dieser Schritt entfernt die überschüssige Färbelösung.
  7. Legen Sie den Rost mit einer Pinzette auf den Tisch und decken Sie den Rost teilweise mit einer Kulturschale ab, um ihn 10 Minuten bei Raumtemperatur trocknen zu lassen.
  8. Speichern Sie das Netz in einer EM-Gitterbox für die zukünftige Beobachtung durch ein TEM bei 80 kV.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
UranylacetatemsArtikel-Nr.: 22400Gefährliche Chemikalie
TransmissionselektronenmikroskopieJEOLJEM2200FS
Glimm-EntladerJEOLJFC1100E
ParaformaldehydemsNr. 19210
Formvar kohlenstoffbeschichtetes Kupfer
Gitter (200 mesh)		emsFCF200-CU
Formvar kohlenstoffbeschichtetes Nickel
Gitter (200 mesh)		emsFCF200-NI

Nachdrucke und Genehmigungen

Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden

Genehmigung beantragen

Schlagwörter

ExosomenreinigungUranylacetat F rbungParaformaldehyd FixierungEM Grid Pr parationGlow Discharge BehandlungExosomenadsorptionGrid Trocknung

Verwandte Artikel