Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vertikale Schlauchmagenentfernung und Scheinverfahren
- Wiegen Sie am Tag der Operation Mäuse, um eine Basisgewichtsmessung zu erhalten.
- Statten Sie den Operationssaal mit einem Anästhesiesystem, einem beheizten Wasserbad und einem Heizkissen aus. Stellen Sie das Wasserbad auf 37 °C ein und erwärmen Sie damit 0,9%ige Kochsalzlösung für die Spülung. Reinigen Sie das Operationsfeld mit 70%igem Ethanol und verwenden Sie eine sterile Technik, um die autoklavierte OP-Packung und die Werkzeuge zu öffnen.
Anmerkung: Das Heizkissen wird verwendet, um das Tier während der Operation und der Genesung von der Narkose warm zu halten.
- Betäuben Sie die Maus in einer Induktionskammer mit 5 % Isofluran und O2 -Flussrate von 1 l/min. Bestätigen Sie, dass sich die Maus in der geeigneten Anästhesieebene befindet, indem Sie eine Zehenklemme durchführen. Halten Sie die Maus mit 1-3 % Isofluran und einer O2 -Flussrate von 0,6 l/min, sobald eine konsistente Anästhesieebene erreicht wurde.
- Sobald die Maus betäubt ist, tragen Sie Augensalbe (siehe Materialtabelle) auf ihre Augen auf, um sie während der Operation feucht zu halten. Zu diesem Zeitpunkt ist auch ein Analgetikum wie Meloxicam (2 mg/kg subkutan) zu verabreichen. Schneiden Sie das Haar vom Nabel bis zur Achselhöhle und halten Sie die Haut sanft nach unten, um für Spannung zu sorgen.
- Da die Haut der Maus dünn und empfindlich ist, achten Sie darauf, beim Scheren der Haare keine Hautläsionen zu verursachen. Reinigen Sie die Haut mit Povidon-Jod und Alkohol.
- Ziehen Sie sterile Handschuhe an und bereiten Sie das sterile Operationsfeld und die Instrumente vor. Führen Sie den Rest des Eingriffs mit steriler Technik durch. Bereiten Sie ein steriles Operationsfeld vor, indem Sie sterile OP-Abdecktücher auf beiden Seiten der Maus anbringen. Verwenden Sie autoklavierte Alufolie, um ein chirurgisches Abdecktuch für die Maus herzustellen.
- Schneide ein kleines Loch in die Alufolie, um den Zugang zum Bauch der Maus zu ermöglichen.
- Machen Sie mit einer Irisschere einen Schnitt in der Haut vom Mittelbauch (Nabel) bis zur Höhe des Xiphoidknorpels. Identifiziere die Linea alba und schneide mit einer Irisschere durch die Körperwand entlang der Linea alba. Verwenden Sie CTAs, um den Magen sanft aus dem Bauch zu heben, und präparieren Sie dann stumpf das Omentum major von der stärkeren Krümmung des Magens.
- Ligatur der kurzen Magenarterie, die zwischen dem Fundus des Magens und der Milz verläuft, indem zwei Ligaturen mit einer monofilen resorbierbaren Naht 7-0 platziert werden. Schneide mit einer Federschere zwischen die beiden Ligaturen. Sobald die Arterie durchtrennt ist, veräußere den Magen vollständig aus der Bauchhöhle. Legen Sie Gaze unter den Magen und befeuchten Sie sie mit Kochsalzlösung, um das Gewebe feucht zu halten.
- Für das VSG-Verfahren ligatieren Sie die hervorstehenden Äste der Magenarterie und der Magenvene mit einem monofilen resorbierbaren Nahtmaterial 7-0 mit einer Kegelnadel mit 3 Würfen für jeden Knoten. Platzieren Sie die Ligaturen knapp unterhalb (d.h. in Richtung der geringeren Krümmung des Magens) der vorgesehenen Durchtrennungslinie.
Anmerkung: Die vorgesehene Durchtrennungslinie beginnt bei ~2 mm oberhalb (d.h. in Richtung der stärkeren Krümmung des Magens) der Herzkerbe des Magens und mindestens 2 mm unterhalb des Margo pilcatus und erstreckt sich bis zum proximalen Ende des rechten Pankreassappens. In der Regel gibt es 4 Gefäße pro Magenwand, die ligiert werden müssen; Dies kann jedoch von Maus zu Maus unterschiedlich sein.
- Um ein Verschütten von Mageninhalt während der Gastrektomie zu verhindern, platzieren Sie eine einfache durchgehende Nahtlinie, die durch beide Magenwände verläuft, direkt unterhalb der vorgesehenen Durchtrennungslinie mit einer monofilen resorbierbaren Naht 6-0 mit einer Kegelnadel. Beginnen Sie die Nahtlinie rechts des Chirurgen von der Speiseröhre und unterhalb des Margo pilcatus und enden Sie knapp über der Bauchspeicheldrüse.
- Platzieren Sie Hämostatika mit dünner Spitze über der Nahtlinie und schneiden Sie mit einer Federschere zwischen Nahtlinie und Hämostaten. Entnehmen Sie das durchtrennte Magengewebe aus dem sterilen Operationsfeld. Verwenden Sie CTAs, um Blut und Verdauung aus dem Magen zu entfernen.
- Verstärken Sie die Apposition der Magenwände mit einem monofilen resorbierbaren Nahtmaterial 6-0 mit einer Kegelnadel nach einem einfachen diskontinuierlichen Muster.
Anmerkung: Es wird ein einfaches diskontinuierliches Nahtmuster empfohlen, da es einen sichereren Verschluss bietet als das einfache kontinuierliche Nahtmuster.
- Spülen Sie den Magenrest während des gesamten Eingriffs mit Kochsalzlösung aus, um das Gewebe feucht und sauber zu halten. Verwenden Sie eine 20G-Sondennadel, die an einer 20-ml-Spritze befestigt ist, um eine Magenspülung mit Kochsalzlösung durchzuführen. Verwenden Sie diese Größe, um sicherzustellen, dass ein ausreichender Druck bereitgestellt wird, ohne eine Schädigung des Magengewebes durch übermäßigen Druck oder eine versehentliche Schädigung des Magengewebes durch die Verwendung einer normalen Spitznadel zu riskieren.
- Verwenden Sie mindestens 20 Knoten, um den Magen sicher zu verschließen; achten Sie auf den Verschluss entlang der Speiseröhrenseite, da diese Seite schwerer zugänglich ist und daher oft eine Dehiszenzstelle ist.
- Stellen Sie sicher, dass keine Undichtigkeiten entstehen, indem Sie mit CTAs sanft auf den Bauch drücken. Wenn Leckagen festgestellt werden, setzen Sie zusätzliche einfache diskontinuierliche Knoten auf die Leckstellen und führen Sie dann eine erneute Dichtheitsprüfung durch. Dichtheitsprüfung, bis keine Leckage mehr festgestellt wird.
- Führen Sie eine abschließende gründliche Spülung des Magens mit mindestens 60 ml Kochsalzlösung durch, um sicherzustellen, dass keine infektiösen Feinstaubpartikel zurückgeblieben sind.
- Platzieren Sie den Magen mit einer CTA wieder in die Bauchhöhle unter der Leber. Platzieren Sie CTAs entlang der dorsalen Seite der Bauchhöhle, um die gesamte überschüssige Flüssigkeit aufzunehmen. Injizieren Sie mit einer stumpfen 18G-Nadel kurz vor dem Verschluss Laktat-Ringer-Lösung (LRS) mit oder ohne Antibiotika (0,5 ml LRS +/- 20 mg/kg Enrofloxacin) direkt in die Bauchhöhle.
Anmerkung: Dies ersetzt den während der Operation aufgetretenen Flüssigkeitsverlust und bietet eine Methode zur direkten Anwendung von Antibiotika auf die Operationsstelle, um die Genesung zu unterstützen.
- Verschließen Sie die Bauchmuskelschicht mit einem monofilen resorbierbaren Nahtmaterial 6-0 mit einer Kegelnadel in einem einfachen, diskontinuierlichen Muster. Schließen Sie dann die Hautschicht mit 6-0 monofil resorbierbarem Nahtmaterial in einem einfachen, kontinuierlichen Muster.
- Legen Sie Gewebekleber auf die Haut und falten Sie die Haut über die Nahtlinie, um die Naht zu vergraben, damit die Maus den Wundverschluss postoperativ nicht stören kann.
- Schalten Sie das Isofluran aus und lassen Sie die Maus 10-15 Minuten lang auf dem Heizkissen ruhen, bevor Sie sie in ihren Heimatkäfig zurückbringen. Lassen Sie das Tier nicht unbeaufsichtigt, bis es wieder zu Bewusstsein gekommen ist und sich bewegen kann.
- Halten Sie die Tiere einzeln, bis sie sich vollständig von der Operation erholt haben.
Anmerkung: Wenn während der gesamten Studie genaue Messungen der Nahrungsaufnahme durchgeführt werden sollen, sollten die Mäuse während der gesamten Studie weiterhin einzeln untergebracht werden. Es besteht die Gefahr, dass Fremdkörper durch den Verzehr von Käfigeinstreu zu Hause verstopft werden. Die Tiere sollten in Käfigen untergebracht werden, in denen es keine Einstreu gibt, mit Ausnahme von Nistmaterial zur Bereicherung (siehe Materialtabelle).
