Extraktion von Skelettmuskeln der Hintergliedmaßen: Ein Verfahren zur Entfernung der Skelettmuskulatur der Hintergliedmaßen aus dem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Bonetto, A. et al. Die tumortragende Maus des Dickdarm-26-Karzinoms als Modell für die Untersuchung der Krebskachexie. J. Vis. Exp. (2016)

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren zur Entfernung von Skelettmuskeln der Hintergliedmaßen aus einem Mausmodell. Die exzidierten Muskeln können bis zur weiteren Analyse bei niedrigeren Temperaturen gelagert werden.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Exzision von Gewebe und Organen

HINWEIS: Für die Verwendung von Geweben in biochemischen oder molekularbiologischen Assays planen Sie, jedes Organ und Gewebe zu wiegen und ein Fragment sofort in vormarkierte Kryoröhrchen zu legen. In flüssigem Stickstoff einfrieren und bei -80 °C lagern.

1. Um eine Kontamination der Gewebeproben mit Fell zu vermeiden, sprühen Sie 70% Ethanol über den gesamten Körper.
2. Platzieren Sie die Maus in Rückenlage auf einem Präparierbett und strecken Sie ein Glied vertikal aus, indem Sie den Fuß an einer erhöhten Bürettenklemme befestigen.
3. Fassen Sie die Haut der unteren Extremität mit einer Dumont-Pinzette und entfernen Sie mit der gebogenen feinen Schere sanft die Haut und die Faszien, wobei die darunter liegenden Muskelbäuche der unteren Extremität freigelegt werden.
4. Identifizieren Sie den Musculus gastrocnemius an der hinteren unteren Extremität anhand seines Ursprungs an den lateralen und medialen Kondylen am hinteren Femur und seines Ansatzes am Fersenbein über die Fersenbeinsehne.
   1. Fahren Sie mit dem Durchtrennen der Gastrocnemius-Fersenbeinsehne fort. Fassen Sie das distale Ende des Gastrocnemius mit einer Dumont-Pinzette und ziehen Sie den Muskelbauch zu seinem Ursprung. Schneiden Sie den Muskel mit einer Schere am Ursprung so nah wie möglich am Oberschenkelknochen ab. Lege den Muskel in eine Schüssel. Sofort wiegen und in einem Röhrchen in flüssigem Stickstoff einfrieren.
      Anmerkung: Achten Sie darauf, den Musculus soleus nicht zusammen mit dem Musculus gastrocnemius zu entfernen. In diesem Fall entfernen Sie vorsichtig den Soleus, indem Sie ihn vorsichtig mit der Pinzette abziehen.
5. Fahren Sie mit der Identifizierung und Entfernung des Musculus tibialis anterior von seinem Ursprung an der anterolateralen Oberfläche der Tibia und seinem Ansatz an der medialen Keilschrift über seine distale Sehne fort.
   1. Um eine Hebelwirkung zu haben, halten Sie den Fuß fest, indem Sie die Ziffern mit dem Zeigefinger und dem Daumen greifen. Führen Sie die Spitze der Dumont-Pinzette unmittelbar unter die oberflächliche distale Sehne des Tibialis ein und bewegen Sie die Pinzette so, dass mit der stumpfen Seite der Bauch des Tibialis-Muskels vom darunter liegenden Bindegewebe gelöst werden kann.
   2. Schneiden Sie die distale Sehne mit der fein gebogenen Schere ab und schneiden Sie dann den Muskel am Ursprung so nah wie möglich an der Tibia durch.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
CD2F1-Mäuse	Harlan	60
Anästhesieapparat	EZ-Anästhesie	EZ-7000
Okt	Tissue-Tek	Artikel-Nr.: 4583
Kälteregler	Leica	CM1850
Kork-Scheiben	Elektronenmikroskopie	Artikel-Nr.: 63305
Microtainer	Bd	365873
Superfrost plus Objektträger	VWR	Tel.: 48311-703
Streptomycin-Penicillin	Cellgro	30-002-CI