Röntgentransplantation von Tumoren aus Patienten: Eine Technik zur Generierung eines experimentellen Mausmodells zur Bewertung des Urothelzellkarzinoms

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Moret, R. et al. Von Patienten abgeleitete orthotope Xenotransplantatmodelle für humanes Urothelzellkarzinom und Darmkrebs, Tumorwachstum und spontane Metastasen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur Generierung eines experimentellen Xenotransplantat-Mausmodells, das zur Untersuchung des Fortschreitens des Urothelzellkarzinoms verwendet werden kann.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. UCC-Mausmodell

Vorbereitung der Mäuse auf den Eingriff
1. Besorgen Sie sich eine 6 bis 8 Wochen alte weibliche NOD/SCID-Maus. Rasieren Sie den unteren Rücken der Maus mit Haarentfernungscreme. Betäuben Sie die Maus in einer Induktionskammer mit Isofluran (2,5% in 100% Sauerstoff, 1 L/min).
2. Nach der Sedierung legen Sie die Maus in Rückenlage, wobei die Schnauze in einem Nasenkegel aus Isofluran steckt und der Rücken fest auf einer dispersiven Elektrode sitzt.
  HINWEIS: Die Maus ist vollständig sediert, wenn sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagiert.
Nehmen Sie die entnommenen UCC-Tumorzellen und resuspendieren Sie sie in 50 μl RPMI-Medien. Die UCC-Zellen mit einem Angiokatheter in die Blase einträufeln (Abbildung 1Aa, Ab).
1. Stellen Sie eine monopolare Elektrokautermaschine auf und stellen Sie sie auf eine Leistung von 4 W ein. Schmieren Sie einen sterilen Angiokatheter von 24 G mit Gleitgelee und führen Sie ihn durch die Harnröhre der weiblichen Maus ein.
  HINWEIS: Es kann ein leichter Widerstand zu spüren sein. Schieben Sie den Angiokatheter vorsichtig nach vorne oder entfernen Sie ihn und wiederholen Sie den Vorgang. Wenn sich der Katheter beim Eintritt verbiegt, führen Sie einen sterilen Führungsdraht zur Hälfte in den Katheter ein, um die Stabilität zu gewährleisten.
2. Führen Sie den 0,025" großen geraden Führungsdraht mit festem Kern 1 mm nach dem Ende des Angiokatheters vollständig ein.
  HINWEIS: Der Draht wird vor dem Eingriff mit Klebeband markiert, um den Haltepunkt von 1 mm anzuzeigen und die Konsistenz zu gewährleisten.
3. Halten Sie den monopolaren Stift 1 s lang an den Führungsdraht, um eine elektrische Reizung der Blasenschleimhaut zu ermöglichen.
4. Setzen Sie einen frischen sterilen Angiokatheter auf eine 1-ml-Luer-Lok-Spritze auf und entnehmen Sie 200 μl gesammelter Zellen.
  HINWEIS: Mindestens 100 μl gehen vom Angiokatheter an die Spritze verloren. Kompensieren Sie das Verlustvolumen bei der Berechnung des Volumens der benötigten Zellsuspension.
5. Entfernen Sie den Führungsdraht und den Angiokatheter aus der Harnröhre der Maus. Führen Sie den Angiokatheter mit einer Spritze ein, die mit den Zellen in die Harnröhre verbunden ist.
  HINWEIS: Der Aufstieg sollte einfacher sein als zuvor.
6. Geben Sie 50 μl Zellen in die Blase der Maus. Warten Sie einige Sekunden, bevor Sie den Angiokatheter entfernen, damit die Zellen an der Blasenwand haften können.
  HINWEIS: Zellen verbleiben in der Blase und entwickeln sich zu einem Primärtumor.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Orthotope UCC-Mausmodelle. (aa) Bei einer weiblichen NOD/SCID-Maus wurde ein Angiokatheter in die Blase eingeführt und über einen Führungsdraht ein Elektrokauterschock an der Blasenwand angelegt. (Ab) Luciferase-markierte UCC-Tumorzellen, BlCaPt15 (2 x 10⁴ Zellen) oder BlCaPt37 (5 x 10⁵ Zellen) mit der Zugabe von 3 x 10⁵