Präparation einer dezellularisierten Rattenniere: ein Verfahren zur Erzeugung eines azellulären vaskularisierten Ganzorgangerüsts aus einer entnommenen Rattenniere

Zusammenfassung

Quelle: Kim, E. H. et al. Vorbereitung von dezellularisierten Nierengerüsten bei Ratten. J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video beschreibt die Aufbereitung einer dezellularisierten Rattenniere. Das erhaltene azelluläre Gefäßgerüst kann als vielversprechende Plattform für das Tissue Engineering von Organtransplantaten dienen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Nierenentnahme und Dezellularisierung

1. Entnehmen Sie die linke Niere mit der Bauchschlagader und der unteren Hohlvene.
2. Lizieren Sie den Harnleiter, die thorakale Aorta, die obere Hohlvene und die Äste der Bauchaorta.
3. Bewahren Sie das Organ in Dulbeccos PBS (DPBS) in einer 10 cm großen Petrischale hydratisiert auf.
4. Kanülieren Sie die Bauchschlagader und die Vena cava inferior mit einem 23G-Katheter. Um Blutreste zu entfernen, verbinden Sie die Kanüle mit einer Peristaltikpumpe und waschen Sie sie 90 Minuten lang mit DPBS (500 mL) und 16 U/mL Heparin bei einer Geschwindigkeit von 5 U/min bei 37 °C.
5. Um die Niere zu dezellularisieren, perfundieren Sie die Niere 3 h lang mit 1 % Triton X-100 (1 L) und dann 6 h lang mit 0,75 % Natriumdodecylsulfat (SDS)-Lösung (2 L) bei einem konstanten Druck von 40 mmHg.
   Anmerkung: Die Niere wird nach 8 h transparent.
6. Um SDS-Reste zu entfernen, perfundieren Sie die Probe 18 h lang (über Nacht) mit 1 % Penicillin in destilliertem Wasser (6 l) und dann 90 min lang mit sterilem DPBS (500 mL) und 16 U/mL Heparin.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Schlauch aus Polyethelyn 50, Katheterschlauch 100 ft	Braintree Wissenschaftlich	.023" × .038"
3-0 Seidenspule Gefäßzugang/Ligatur bei Ratten	Braintree Wissenschaftlich	SUT-S 110
Feine Schere zum Schneiden von Faszien/ Bindegewebe	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Artikel-Nr.: 14058-09
25 Gauge Zoll Führungsnadel (für Gefäßkatheter)	Becton Dickinson	305145
Schwartz microserrefine Gefäßklemmen	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	18052-01 (gerade)
5-0 Seidenspule Gefäßzugang/Ligatur bei Maus	Braintree Wissenschaftlich	SUT-S 106