Method Article

Festphasen-Mikroextraktionsprobenahme: Eine sondenbasierte Technik zur Probenextraktion aus Transplantatgewebe

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Stryjak, I. et al. Verwendung einer chemischen Biopsie zur Bewertung der Transplantatqualität. J. Vis. Exp. (2020)

In diesem Video demonstrieren wir die SPME-Sonden-basierte Extraktion von Metaboliten aus einer vorentnommenen Spenderniere. Die extrahierten Metaboliten können für metabolomische und lipidomische Analysen verwendet werden, um die Organqualität für eine Transplantation zu beurteilen.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für menschliches Wohlergehen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Vorbereitung von Sonden

  1. Bereiten Sie Sonden aus Titan-Nickel-Legierungen (40 mm Länge; 0,2 mm Durchmesser) vor, die mit einem 7 mm Mix-Mode-Sorptionsmittel beschichtet sind. Die Anzahl der Sonden hängt von den Zeitpunkten ab, die während des gesamten Verfahrens anvisiert werden, und von der Anzahl der Wiederholungen (3 werden pro Zeitpunkt empfohlen).
    Anme....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
EssigsäureMerck5330010050Additiv für mobile Phasen
AcetonitrilAlchem696-34967-4X2.5LHPLC-Lösungsmittel
AmmoniumacetatMerck5330040050Additiv für mobile Phasen
BANKMIXER XL MEHRROHR-VORTEXERBenchmark WissenschaftlichBV1010Vortex-Mischer
MützenPerlan TechnologienTel.: 5183-2076Blauer Kunststoff TP, PTFE/Si spta, vorgeschlitzt, 100PK
ChloroformMerck1024441000
Discovery HS F5 Supelguard Kartusche, 3 μm, L × I.D. 2 cm × 2,1 mmMerck567570-UHPLC-Vorsäule
Discovery HS F5, 2,1 mm x 100 mm, 3 μmMerck567502-UHPLC-Säule
AmeisensäureAlchemArtikel-Nr.: 497-94318-50MLAdditiv für mobile Phasen
Fläschchen aus GlasPerlan TechnologienArtikel-Nr.: 5182-0714
HILIC Luna 3 μm, 200A, 100 x 2,0 mmShim-PolPHX-00D-4449-B0HPLC-Säule
HILIC SecurityGuard Kartusche, 3 μm, 4 x 2,0 mmShim-PolPHX-AJ0-8328HPLC-Vorsäule
IsopropanolAlchem231-AL03262500HPLC-Lösungsmittel
MethanolAlchem696-34966-4X2.5LHPLC-Lösungsmittel
Nanoreines WasserMerck1037281002HPLC-Lösungsmittel
Q Exactive Focus Hybrid-Quadrupol-Orbitrap MSThermo ScientificQ Exaktiver FokusMassenspektrometer
SeQuant ZIC-cHILIC 3μm,100Å 100 x 2,1 mmMerck1506570001HPLC-Säule
SeQuant ZIC-HILIC Schutzvorrichtung 20 x 2,1 mmMerck1504360001HPLC-Vorsäule
SPME LC Fasersonden, gemischter ModusSupelcoPrototyp-Fasern
UltiMate 3000 HPLC-SystemeThermo ScientificUltiMate 3000HPLC-System
Vial-Einsätze (deaktiviert)Perlan TechnologienTel.: 5181-8872
XSelect CSH C18 3,5μm 2,1x75mmGewässer186005644HPLC-Säule
XSelect CSH C18 VanGuard Kartusche 3,5μm, 2,1x5mmGewässer186007811HPLC-Vorsäule

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Solid Phase MicroextractionSPME ProbeMetabolite ExtractionGraft Tissue SamplingOrgan Quality AssessmentHydroalcoholic CleaningActivation SolutionDesorption SolutionLC MS AnalysisSterile Processing

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