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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Betäubendes Tier
- Verwenden Sie ein Tischanästhesiesystem, um das Tier mit Isofluran zu betäuben. Schalten Sie den Ø2-Tank ein und stellen Sie den Sauerstoffdurchflussmesser auf 1 l/min ein.
- Setzen Sie eine erwachsene weibliche C57BL/6J-Maus in die Induktionskammer ein. Schalten Sie den Isofluran-Verdampfer ein und stellen Sie ihn auf 3% für die Induktion ein. Die Maus sollte innerhalb von 2 Minuten in Narkose sein. Verabreichen Sie das Analgetikum Buprenorphin (0,1 mg/kg) subkutan, nachdem Sie die Maus aus der Induktionskammer zur präventiven Analgesie genommen haben.
Anmerkung: In diesem Protokoll werden weibliche Mäuse verwendet, da mit ihnen während der Harnröhrenkatheterisierung leichter zu arbeiten ist. Das Protokoll funktioniert auch bei männlichen Mäusen, aber es ist besondere Vorsicht geboten.
- Tragen Sie eine Augensalbe auf die Augen des Tieres auf, um Trockenheit zu verhindern. Legen Sie die betäubte Maus mit der Vorderseite nach oben auf ein Heizkissen und legen Sie die Nase in den Nasenkonus. Drehen Sie den Schalter des Luftkreislaufs, um Isofluran durch den Nasenkonus strömen zu lassen.
- Den Kopf und den Nasenkegel mit Klebeband festhalten. Stellen Sie den Isofluran-Verdampfer zur Wartung auf 2% ein.
- Fesseln Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Führen Sie Zehenkneiftests durch, um sicherzustellen, dass sich das Tier in tiefer Narkose befindet, und rasieren Sie dann den Bauchbereich.
>2. Harnabbau und Blasenspülung
- Tragen Sie Gleitmittel auf den Katheter auf (24 G, Länge 2,11 cm, Außendurchmesser 0,045 cm) auf und stellen Sie sicher, dass die Außenfläche vollständig bedeckt ist.
- Führen Sie den Katheter in die Harnröhrenöffnung ein und schieben Sie ihn langsam bis zur Blase, dann sollte der Urin durch den Katheter abfließen. Drücken Sie sanft auf den Bauch, um den Urinmangel zu unterstützen.
- Überprüfen Sie, ob der Katheter richtig in die Blase eingeführt ist, indem Sie den automatischen Urinabfluss beobachten. Vermeiden Sie es, die Harnröhre und die Blasenwand zu durchstechen und tragen Sie bei Bedarf mehrmals Gleitmittel auf.
- Entsorgen Sie den Urin mit einer Pipette in ein Becherglas.
- Pipettieren Sie 80 μl phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in das äußere Ende des Katheters, wobei sich das andere Ende noch in der Blase befindet. Setzen Sie vorsichtig eine 1-ml-Spritze auf den Katheter. Drücken Sie vorsichtig auf die Spritze, um das PBS in die Blase zu injizieren. Lassen Sie etwas PBS im Katheter, um Luftblasen in der Blase zu vermeiden.
- Entfernen Sie die Spritze. Warten Sie, bis PBS aus der Blase abfließt. Drücken Sie vorsichtig auf den Bauch, um PBS zu evakuieren.
- Entsorgen Sie das PBS im Katheter mit einer Pipette in den Abfallbecher.
- Wiederholen Sie die PBS-Wäsche (Schritte 2.4 bis 2.6) noch zweimal.
Anmerkung: Bei diesen Waschschritten ist es unerlässlich, schonend zu arbeiten. Blut im Katheter oder das Versagen des automatischen Flüssigkeitsabflusses deutet in der Regel darauf hin, dass die Harnröhre durchstochen wurde