Periodische saure Schiff- oder PAS-Färbung: Eine Methode zur Beurteilung der strukturellen Deformitäten von Glomerulus

>1. Periodischer saurer Schiff (PAS) Fleck

HINWEIS: Die PAS-Färbung hebt die Basalmembranen der glomerulären Kapillarschlingen und das röhrenförmige Epithel hervor. Es ermöglicht eine detaillierte Visualisierung der glomerulären Zellen, der mesangialen Matrix und der potentiellen Expansion sowie möglicher Veränderungen des GBM (d.h. Verdickungen und Unregelmäßigkeiten).

1. Die in Paraffin eingebettete, PFA-fixierte Nierenrinde wird mit einem Mikrotom von 5 μm Dicke auf Poly-L-Lysin-beschichtete Objektträger geschnitten. 1 h bei 37 °C trocknen. Stellen Sie sicher, dass der Schnitt keine Falten oder Löcher enthält, die die Morphologie unter dem Mikroskop verzerren können.
2. Entparaffinieren Sie Objektträger, indem Sie zweimal für jeweils 3 Minuten in Xylol (VORSICHT, reizend; im Abzug verwenden), zweimal in 100 % EtOH für jeweils 3 Minuten und dann einmal in 95 %, 70 % und 50 % EtOH für jeweils 3 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Rehydrieren Sie die Objektträger in dH₂O.
3. Inkubieren Sie die Objektträger 5 Minuten lang in periodischer saurer Lösung (VORSICHT, reizend; Verwendung im Abzug) (1 g/dl) und spülen Sie die Objektträger dann in mehreren Wechseln von dH₂O. Verwenden Sie einen Behälter mit 100 mL dH₂O bei Raumtemperatur.
4. Inkubieren Sie Objektträger in Schiff-Reagenz (Parasoanilin HCl 6 g/l und Natriummetabisulfit 4% in HCl 0,25 mol/l) für 15 min bei Raumtemperatur. Waschen Sie die Objektträger 5 Minuten lang unter fließendem Leitungswasser.
5. Mit Hämatoxylin 3 s gegenfärben, bevor Sie die Objektträger 15 Min. lang gründlich unter fließendem Leitungswasser abspülen < /> Anmerkung: Möglicherweise sind einige Optimierungen erforderlich, um den optimalen Zeitpunkt für die Hämatoxylin-Färbung zu bestimmen.
6. Dehydrieren Sie Objektträger mit der Umkehrung des Entparaffinierungsprotokolls. Mit Xylol abschließen.
7. Dias an der Luft trocknen und mit Einbettmedien auf Xylolbasis montieren.
8. Aufnahme am Lichtmikroskop bei 400-facher Vergrößerung zur Beurteilung glomerulärer Strukturen. Beurteilen Sie Folgendes: Verdickung und Unregelmäßigkeiten des GBM, Kollaps der Kapillarschlingen, fibrotisches Gewebe, Sklerose, zelluläre Proliferation (Endothel-, Podozyten- und Mesangial- oder Entzündungszellen, die das Büschel infiltrieren).
   Anmerkung: Für eine umfassende Beurteilung der glomerulären Pathophysiologie sollten Läsionen an anderen Stellen der Niere untersucht werden, z. B. in den Tubuli.