>1. Kryokonservierung von Gehirnen, die Gliomtumoren beherbergen
- Bereiten Sie vor der Kryokonservierung des Gehirns ein mit kaltem Isopentan/2-Methylbutan gefülltes Glas vor und geben Sie es in einen mit flüssigem Stickstoff gefüllten Behälter. Lassen Sie das Lösungsmittel abkühlen.
- Nehmen Sie das Gehirn aus der 30%igen Saccharoselösung und tupfen Sie es auf einem Filterpapier trocken.
- Beschriften Sie die Kryoform mit einem Permanentmarker. Geben Sie vorsichtig ca. 5 ml OCT (optimale Schnitttemperaturverbindung) in die Mitte des Kryomolds, um Luftblasen zu vermeiden.
- Legen Sie das Gehirn in einen Kryomold, der OCT in der gewünschten Ausrichtung enthält. Füllen Sie die Form mit OCT, bis das Gehirn vollständig untergetaucht ist. Platzieren Sie mit einer sauberen Pinzette schnell den Kryomold mit OCT und das Gehirn in das kalte Isopentan/2-Methylbutan.
- Sobald das OCT erstarrt ist (~30–40 s), entfernen Sie das Kryomold mit dem Gehirn und legen Sie es in Trockeneis. Lassen Sie die Form, die das Gehirn in 2-Methylbutan enthält, nicht länger als 2 min stehen, da dies zu Rissen in der festen OCT führen kann. Wickeln Sie das Kryomold mit dem Gehirn in Aluminiumfolie ein und lagern Sie es bei -80 °C.