Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Allgemeine präoperative Vorbereitung
- Fasten Sie die Mäuse 6 Stunden vor der Operation. Gel-Diätfutter wurde 3 Tage vor der Operation und ausschließlich einen Tag vor der Operation verabreicht. Induzieren Sie die Anästhesie in einer Kammer mit 5 % Isofluran (0,4 l/min) und O2 (Sauerstoff; 0,4 l/min). Führen Sie einen Zehenkneiftest durch, um zu bestätigen, dass die Anästhesie wirksam ist. Verabreichen Sie Analgetika (0,1 mg/kg Buprenorphin), Antibiotika (10 mg/kg Marbofloxacin) und Prokinetika (1 mg/kg Metoclopramid) über subkutane Injektionen.
- Weisen Sie einen speziellen Arbeitsbereich für chirurgische Eingriffe zu (weit entfernt vom Laborverkehr und von Lüftungsventilatoren). Reinigen Sie den Operationsbereich mit speziellen Desinfektionsmitteln für harte Oberflächen. Legen Sie ein Heizkissen auf den Arbeitsbereich des Arbeitsbereichs, um die Homöothermie der Maus während der Operation aufrechtzuerhalten. Tragen Sie ein sauberes, saugfähiges Unterlegepad auf das Heizkissen auf.
- Rasieren Sie den Bauch vom Brustbein bis zum Becken mit einem Elektrorasierer. Wickeln Sie den Bauch der Maus in sterilisierte Plastikfolie ein (Abbildung 1A) und legen Sie die Maus in Rückenlage auf das Heizkissen.
- Tragen Sie Tierarztsalbe auf die Augen auf, um Trockenheit unter Narkose zu verhindern. Setzen Sie die Maus in den Nasenkonus und halten Sie die Narkose mit 2% Isofluran (0,4 l/min) und O2 (0,4 l/min) aufrecht.
- Ziehen Sie vor Beginn der Operation einen sterilen Untersuchungskittel, eine Einweg-Peeling-Mütze, eine Gesichtsmaske und sterile Handschuhe an. Öffnen Sie eine autoklavierte Packung mit einem sterilisierten chirurgischen Instrumentenset, das für alle Schritte der Operation benötigt wird. Schneiden Sie ein Fenster in die sterilisierte Plastikfolie und desinfizieren Sie die Haut mit 2 aufeinanderfolgenden Povidon-Jod-Lösungen.
>2. Roux-en-Y Magenbypass: Chirurgischer Eingriff
- Mediane Laparotomie
- Führen Sie unter einem binokularen Mikroskop und mit einem Skalpell einen Mittellinienschnitt vom Brustbein bis zur Mitte des Bauches durch, um die Bauchhöhle zu öffnen (beschädigen Sie nicht die Bauchmuskulatur). Schützen Sie die Haut mit einer sterilen Kompresse, die mit 37 °C Kochsalzlösung getränkt ist (Abbildung 1B).
- Biliopankreatische Gliedmaße und alimentäre Gliedmaße
- Externalisieren Sie den Darm (Abbildung 1C). Messen Sie 8 cm vom Pylorus entfernt und führen Sie zwei Ligaturen des Darms mit 5,0 nicht resorbierbaren Nähten durch (Abbildung 1D).
- Schneiden Sie den Darm zwischen den beiden Ligaturen (Abbildung 1E). Platzieren Sie den proximalen Schenkel der beiden Enden im oberen linken Quadranten des Bauches. Hinweis: Dies wird als Nahrungsglied verwendet (Abbildung 1F).
- Platzieren Sie den distalen Schenkel der beiden Enden, die dem Verdauungsglied zugewandt sind, 6 cm unterhalb des proximalen Gliedes (Abbildung 1F).
Anmerkung: Dieser wird als Gallenglied verwendet.
- Jejuno-Jejunostomie
- Schneiden Sie sowohl die proximale Extremität als auch die Darmschlinge mit einer Mikroschere und führen Sie zwei gleich lange antimesenteriale Schnitte durch (Abbildung 1G und 1H).
- Führen Sie eine Anastomose von Seite zu Seite mit zwei nicht resorbierbaren Nähten 8.0 durch. Führen Sie zuerst die dorsale Seitenanastomose durch (Abbildung 1I), gefolgt von der ventralen Seitenanastomose (Abbildung 1J).
- Rollen Sie 2 angefeuchtete Wattestäbchen vorsichtig zu jeder Seite der Anastomose, um sicherzustellen, dass die Naht auslaufsicher ist. Komplett mit 8.0 nicht resorbierbaren Nähten für den Fall einer Leckage.
- Gastro-Jejunostomie
- Mobilisieren Sie den Magen vorsichtig mit angefeuchteten Wattestäbchen. Befreien Sie den Magen mit angefeuchteten Wattestäbchen oder einer Mikroschere von seinen seitlichen, engen Bindegewebsansätzen.
- Externalisieren Sie den Magen vorsichtig vollständig und legen Sie eine resorbierbare hämostatische Kollagenkompresse hinter den Magen. Führen Sie eine Ligatur des Pylorus mit einer nicht resorbierbaren Naht 5.0 durch, die mit einer gebogenen Mikrozange durch das Omentum geführt wird (Abbildung 1K und 1L).
- Schneiden Sie sowohl die ventrale Seite des Magens, 1,5 cm vom Pylorus entfernt, als auch die distale Extremität mit einer Mikroschere und erstellen Sie zwei gleich lange Schnitte (Abbildung 1M).
- Führen Sie eine Anastomose von Seite zu Seite mit zwei nicht resorbierbaren Nähten 8.0 durch. Beginnen Sie mit der Anastomose auf der dorsalen Seite (Abbildung 1N) und führen Sie dann die Anastomose auf der ventralen Seite durch (Abbildung 1O). Rollen Sie 2 angefeuchtete Wattestäbchen vorsichtig zu jeder Seite der Anastomose, um sicherzustellen, dass die Naht auslaufsicher ist. Komplett mit 8.0 nicht resorbierbaren Nähten für den Fall einer Leckage.
- Verschluss des Bauches
- Verschließen Sie die Muskelschicht der Bauchdecke mit 5.0 nicht resorbierbaren Nähten (Abbildung 1P). Reduzieren Sie die Anästhesie, indem Sie die Isoflurankonzentration auf 1% reduzieren. Verschließen Sie die Haut mit 5.0 nicht resorbierbaren Nähten (Abbildung 1Q). 25 ml/kg warme Kochsalzlösung durch subkutane Injektion verabreichen.
>3. Allgemeine postoperative Versorgung
- Stoppen Sie Isofluran und fahren Sie mit einem O2 -Fluss von 0,8 l/min fort, bis die Maus vollständig wach ist. Lassen Sie die Maus nicht unbeaufsichtigt, bis sie die motorische Kontrolle wiedererlangt hat, was dadurch angezeigt wird, dass das Tier beginnt, sich im Käfig zu bewegen und in der Lage ist, zu stehen und zu gehen, ohne zu fallen.
- Legen Sie die Maus (nur eine Maus pro Käfig) 5 Tage lang in einen Inkubator unter 30 °C Temperaturbedingungen.
- Behalten Sie die Eisen- (0,5 mg/kg/Tag; subkutane Injektion) und Vitamin-Supplementierung (800 mg/180 ml in Wasser) in den RYGB-Mäusen bis zum Ende des Protokolls bei.
- Freier Zugang zu Gel-Diätnahrung (fettreiche Gel-Diät: 10 % Schmalz, 10 % Flüssigzucker, 57 % Wasser) für 5 Tage nach der Operation. Führen Sie 3 Tage nach der Operation wieder eine feste Ernährung ein.
- Subkutan injizieren Sie Buprenorphin (0,1 mg/kg, zweimal täglich, von Tag 0 bis Tag 3 nach der Operation), Meloxicam (1 mg/kg, von Tag 0 bis Tag 3 nach der Operation), Metoclopramid (1 mg/kg, von Tag 0 bis Tag 5 nach der Operation) und Marbofloxacin (10 mg/kg, von Tag 0 bis Tag 3 nach der Operation)
