CreER-LoxP-System-basierte Zielgen-Inaktivierung: Ein Tamoxifen-induzierbares Cre-Rekombinase-System für den Zielgen-Knockout in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Hübner, E. K., et al. Konstitutive und induzierbare Systeme für die genetische In-vivo-Modifikation von Maus-Hepatozyten durch hydrodynamische Schwanzveneninjektion.J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video beschreibt ein Verfahren zum Knockout des Zielgens unter Verwendung eines Tamoxifen-induzierbaren Cre-Rekombinase-Systems nach intraperitonealer Injektion von Tamoxifen in einem Mausmodell.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Induktion von transfiziertem CreER mit Tamoxifen

VORSICHT: Tamoxifen ist schädlich, kann krebserregend sein oder die Fruchtbarkeit beeinträchtigen. Bitte beachten Sie das Sicherheitsdatenblatt.

1. Planen Sie intraperitoneale Tamoxifen-Injektionen an drei aufeinanderfolgenden Tagen.
2. Löse an Tag 1 10 mg Tamoxifen in 40 μl Ethanol auf. Bei 55 °C 10 min inkubieren. Mehrmals vortexen, bis sich das Tamoxifen aufgelöst hat.
3. 960 μl Maisöl hinzufügen. 5 Minuten bei 55 °C inkubieren. Mehrmals vortexen, um eine klare Lösung zu erhalten.
4. Bereiten Sie die Lösung in einer 1-ml-Insulinspritze mit einer 27-g-Nadel vor.
5. Greifen Sie die Maus vorsichtig mit dem Daumen und dem zweiten Finger nach dem Hals der Maus und fixieren Sie den Schwanz zwischen der Basis der Hand und dem vierten und fünften Finger.
6. Injizieren Sie 0,1 ml (= 1 mg Tamoxifen) der Lösung intraperitoneal in den linken unteren Quadranten des Abdomens.
7. Wiederholen Sie die Injektionen an den Tagen zwei und drei.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Injekt Spritze F 1 ml	Braun	9166017V	Zur intraperitonealen Injektion
Tamoxifen	Sigma-Aldrich	T5648-1G	Für die CreER-Aktivierung
Maiskeimöl	Sigma-Aldrich	Nr. C8267-500ML	Träger für Tamoxifen-Injektionen