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Induzierbare Tet-On-regulierbare systembasierte Genexpression in vivo: Ein Tetracyclin-induziertes Genexpressionssystem für die Aktivierung der Zielgentranskription im Mausmodell

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Quelle: Hübner, E. K. et al.Konstitutive und induzierbare Systeme für die genetische In-vivo-Modifikation von Maus-Hepatozyten durch hydrodynamische Schwanzveneninjektion. J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video demonstriert das Genexpressionssystem von Tetracyclin oder Tet-On in einem Mausmodell. In Gegenwart von Doxycyclin, einem Tetracyclin-Derivat, wird das Tet-On-System, bestehend aus reversem Tetracyclin-kontrolliertem Transaktivatorprotein, aktiviert und exprimiert das interessierende Gen.

Protokoll

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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Induktion der Tetracyclin-abhängigen Gen- oder shRNA-Expression

VORSICHT: Doxycyclin kann schädlich sein. Bitte beachten Sie das Sicherheitsdatenblatt.

HINWEIS: Abhängig von der Art und Dauer des Experiments kann Doxycyclin mit Trinkwasser zugeführt werden.

  1. Für Kurzzeitexperimente (<10 Tage) verabreichen Sie Doxycyclin über das Trinkwasser unter Verwendung des folgenden Protokolls.
    1. 5 g Saccharose in 100 ml Leitungswasser auflösen. Autoklav.
    2. 100 mg Doxycyclin-Hyclat werden in 5 ml Saccharoselösung (Schritt 1.1.1) in einem konischen 15-ml-Röhrchen gelöst.
    3. Mit einer 10-ml-Spritze die Lösung durch einen 0,2-μm-Filter sterilfiltrieren. Zu der in Schritt 1.1.1 hergestellten Saccharoselösung geben.
    4. Geben Sie der Maus Doxycyclin-Saccharose-Lösung als Trinkwasser. Täglich kontrollieren und ersetzen, wenn die Lösung trüb wird, was auf eine bakterielle Überwucherung hinweist (klare Lösung spätestens nach drei Tagen ersetzen).

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
D(+)-SaccharoseCarl RothNr. 4621.1Zum Süßen der Doxycylinlösung
Doxycyclin-HyclatAppliChemNr. A2951,0025Aktivierung der Tetracyclin-abhängigen Expression
Injekt 10 ml SpritzeBraunArtikel-Nr.: 4606108V
Filtropur S 0.2SarstedtArtikel-Nr.: 831.826.001Zur Filtration von Doxycyclin

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Schlagwörter

Tet On SystemDoxycyklin Induktionreverser Tetracyclin gesteuerter TransaktivatorTetracyclin responsives Elementhydrodynamische Injektion in die SchwanzveneMaus Hepatozytenkonditionale Genexpressiontranskriptionelle AktivierungReportergenexpression

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