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Binäre bakterielle künstliche Chromosomenvektor-basierte Gentransformation in Arabidopsis-Pflanzen: Eine Technik zur Erzeugung transgener Pflanzen mit Single-Copy-Insertion

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Tark-Dame, M., et al. Erzeugung transgener Pflanzen mit Einzelkopie-Insertionen unter Verwendung des binären BIBAC-GW-Vektors. J. Vis. Exp. (2018).

In diesem Video demonstrieren wir die Erzeugung von transgenen Arabidopsis-Pflanzen, die durch Agrobacterium-vermittelte binäre bakterielle künstliche Chromosomen-basierte Gentransformation stabiles Transgen exprimieren.

Protocol

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1. Arabidopsis Transformation

  1. Bereiten Sie die Arabidopsis-Pflanzen für die Umwandlung vor.
    1. Ziehen Sie Arabidopsis-Pflanzen in einem Gewächshaus oder einer klimatisierten Wachstumskammer an, bis sie blühen (12 Töpfe mit je 9 Pflanzen pro Dip).
    2. Schneiden Sie die ersten Schrauben ab, damit weitere Sekundärschrauben hervortreten können. Die Pflanzen sind 4–6 Tage nach dem Schnitt bereit zum Tauchen, wenn die Pflanzen viele unreife Blütenköpfe und nicht viele befruchtete Siliques haben.
  2. Florales Tauchen
    1. Tauchen Sie die Blütenstände für 5–10 Sekunden in e....

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Results

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Abbildung 1: Mit Arabidopsis-Sämlingen gefülltes Tablett vor und nach der Glufosinat-Ammonium-Behandlung. Sämlinge, die das in der pBIBAC-BAR-GW T-DNA vorhandene Bar-Gen nicht exprimieren, sterben nach dem Besprühen mit Glufosinat-Ammonium-Lösung. Die Fotos zeigen dieselbe Schale mit Sämlingen (A) vor dem Besprühen mit Glufosinat-Ammonium, 14 Tage nach der Aussaat, und (B) 10 Tage später,.......

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kanamycinsulfat-MonohydratDuchefaNr. K0126
Gateway LR Klonase-Enzymmischung Thermo Scientific - InvitrogenTel.: 11791-019
Murashige Skoog mittelDuchefaNr. M0221
AgarBdArtikel-Nr.: 214010
Glufosinat-Ammonium (Basta)Bayer79391781
Phosphor-ImagerGE Healthcare Life SciencesTaifun FLA 7000
Frischhaltefolie (Saran-Folie)Omnilabo1090681
AgaroseThermo Scientific - Invitrogen16500
kg

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Tags

Binary Bacterial Artificial ChromosomeAgrobacterium mediated TransformationArabidopsis PlantsSingle copy InsertionFloral Dipping TechniqueFluorescence MicroscopyHerbicide Resistance ScreeningGenomic DNA ExtractionPCR AnalysisSeed specific Promoter

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