Morpholino-vermittelte Geneditierung: Eine Gen-Knockdown-Technik unter Verwendung von translational blockierenden Morpholino-Oligonukleotiden in einzelligen Höhlenfischeiern

Zusammenfassung

Quelle: Stahl, B. A. et al., Manipulation der Genfunktion bei mexikanischen Höhlenfischen. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt eine Gen-Knockdown-Technik mit translational blockierenden Morpholinos, die im Einzelzellstadium des Höhlenfisches mikroinjiziert werden. Morpholinos sind DNA-Oligonukleotide, die an die komplementäre Sequenz der Ziel-mRNA binden und deren Translation in ein Protein blockieren. Folglich werden Morpholinos als molekulare Werkzeuge verwendet, um die Expression eines Gens vorübergehend zu stoppen oder zu reduzieren.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Morpholino-Oligo-Design

HINWEIS: Sequenzen für A. mexicanus sind über das National Center of Biotechnology Information (NCBI) Gene und NCBI SRA (https://www.ncbi.nlm.nih.gov) sowie über den Ensembl Genombrowser (https://www.ensembl.org) verfügbar. Bei der Entwicklung eines Morpholinos für den Einsatz sowohl in Oberflächen- als auch in höhlenbewohnenden Formen ist es entscheidend, in diesem Stadium jegliche genetis....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Fischzucht & Eizellversorgung
Feinmaschiges Fischernetz	Penn Plax	BN4
Heizung für Aquarien	Aqueon	100106108
Eierfallen	Sonderanfertigung	Na	Entwerfen und erstellen Sie einen Kunststoffrost, der zum Schutz der Eier am Boden des Tanks platziert
Glaspipetten	Fisher Scientific	13-678-20C
Pipettieren Sie Glühbirnen	Fisher Scientific	Tel.: 03-448-21
Agarose	Fisher Scientific	BP160-500
Eierformen	Adaptive wissenschaftliche Werkzeuge	TU-1
Morpholino liefert
Steuerung Morpholino	Gene Tools, LLC	Serienmäßige Steuerung olio
Kundenspezifischer Morpholino	Gene Tools, LLC	Na
Phenolrot	Sigma Aldrich	Artikel-Nr.: P0290-100ML
Verbrauchsmaterialien für Mikroinjektionen
Glas-Kapillarrohre	Sutter Instrumente	BF100-58-10
Pipettenabzieher	Sutter Instrumente	P-97
Pico-Injektor	Warner Instruments	PLI-100A
Mikromanipulator	Welt Präzisionsinstrumente	M3301R
Mikromanipulator	Stand World Precision Instruments	M10
Mikrofon-Manipulator-Basis	Welt Präzisionsinstrumente	Stahlplatten-Sockel, 10 lbs

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