Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie: Eine Technik zur vorläufigen Trennung und Quantifizierung von Lipiden aus Neutrophilen

Abstract

Quelle: Brogden, G., et al. Methoden zur Untersuchung von Lipidveränderungen in Neutrophilen und der anschließenden Bildung von extrazellulären Neutrophilenfallen. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video demonstriert eine Technik zur vorläufigen Trennung und Quantifizierung von Lipiden aus humanen Neutrophilen aus peripherem Blut. Diese Technik hilft bei der ersten Bewertung von Zielanalyten, bevor mit der HPLC fortgefahren wird.

Protocol

1. Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie (HPTLC) zur Semi-Quantifizierung der Menge mehrerer Lipide, einschließlich Cholesterin, Phospholipide und Sphingomyelin

1. Bereiten Sie die folgenden vier Lauflösungen und Färbelösungen vor.
   1. Lösung 1: Mischen Sie Ethylacetat (26,6%), 1-Propanol (26,6%), Chloroform (26,6%), Methanol (26,6%) und Kaliumchlorid (9,6%). Bereiten Sie KCl vor, indem Sie 0,25 g KCl in 100 ml Wasser in HPLC-Qualität auflösen.
   2. Lösung 2: Mischen Sie n-Hexan (73%), Diethylether (23%) und Zitronensäure (2%).
   3. Lösung 3: 100% n-Hexan.
   4. Bereiten Sie die Färbelösung vor, indem Sie destilliertes Wasser (90 m....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-Propanol	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 33538
10 μL Spritze	Hamilton	701 NR 10 μl
Diethylether	Sigma-Aldrich	346136
Ethylacetat	Carl Roth	7336,2
Kupfer(II)-sulfatpentahydrat	Merck	1027805000
Chloroform	Carl Roth	7331.1
CP ATLAS Software	Lazarsoftware	arabische Ziffer
Methanol	Carl Roth	7342.1
n-Hexan	Carl Roth	7339.1
Phosphorsäure	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 30417
Kaliumchlorid	Merck	49.361.000
HPTLC Kieselgel 60	Merck	105553