A. cerebri media (MCA) Ligation ist eine Technik, fokaler zerebraler Ischämie im Tiermodell zu studieren. Bei dieser Methode ist die mittlere Hirnarterie durch Kraniotomie freigelegt und ligiert durch Kauterisation. Diese Methode liefert gut reproduzierbare Infarktvolumen und erhöhte postoperative Überlebensrate im Vergleich zu anderen Methoden zur Verfügung.
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Methodenartikel
Die Anwendung des dauerhaften mittleren Hirnarterie Ligation in der Maus
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Fokaler zerebraler Ischämie ist eine der häufigsten Form des Schlaganfalls bei Patienten gesehen. Durch die klinische Bedeutung hat es eine längere Anstrengung, um geeignete Tiermodelle zu entwickeln, um die Ereignisse, die während der ischämischen Insult entfalten Studie. Diese Techniken umfassen vorübergehend oder bleibend, fokale oder globale Ischämie Modelle mit vielen verschiedenen Tiermodellen, die häufigsten sind Nagetiere.
Die permanente MCA Ligationsmethode die auch als pMCAo ist in der Literatur wird weitgehend als fokale Ischämie-Modell in Nagetieren 1-6 verwendeten. Diese Methode wurde ursprünglich für die Ratten durch Tamura et al. im Jahr 1981 sieben. In diesem Protokoll eine Kraniotomie wurde verwendet, um Zugriff auf die MCA und der proximalen Regionen durch Elektrokoagulation waren verschlossen. Die Infarkte betreffen meist kortikale und manchmal striatalen Regionen, je nach Lage der Okklusion. Diese Technik ist inzwischen gut etabliert und wird in vielen Labors 8-13. Der frühe Einsatz dieser Technik führte zur Definition und Beschreibung von "Infarktkern" und "Penumbra" 14-16, und es wird oft benutzt, um potenzielle neuroprotektive Verbindungen 10, 12, 13, 17 zu bewerten. Obwohl die anfänglichen Studien an Ratten durchgeführt wurden, hat permanent MCA Ligation erfolgreich an Mäusen mit leichten Modifikationen 18-20 verwendet.
Dieses Modell liefert reproduzierbare Infarkte und eine erhöhte post-Überlebensraten. Etwa 80% der ischämischen Schlaganfälle bei Menschen in der MCA Bereich 21 passieren und somit ist dies ein sehr wichtiges Modell für Schlaganfall-Studien. Derzeit gibt es einen Mangel an wirksamen Therapien zur Verfügung Schlaganfall-Patienten, und somit gibt es einen Bedarf für gute Modelle, um potenzielle pharmakologische Verbindungen testen und zu evaluieren physiologische Ergebnisse. Diese Methode kann auch für die intrazelluläre Hypoxie Reaktionsmechanismen in vivo verwendet werden.
Hier präsentieren wir die MCA Ligation Operation in einem C57/BL6 Maus. Wir beschreiben die präoperative Vorbereitung, MCA Ligation Chirurgie und 2,3,5 Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)-Färbung für die Quantifizierung der Infarktgröße Bände.
Protokoll
Dieses Protokoll wurde von der University of Rochester Ausschuss sich mit der ethischen Verwendung von Tieren in der Forschung (UCAR) zugelassen. Aseptische Techniken sollten in das Protokoll befolgt werden. Die Verwendung von sterilen Handschuhen und einer Maske erforderlich ist.
Alle Geräte, Materialien, Chemikalien und Werkzeuge, die während des Protokolls verwendet werden, sind in Tabelle 1 beschrieben.
1. Präoperative Vorbereitung
- Inject Mäusen subkutan mit Buprenorphin (0.05mg/kg) 2 h vor der Operation, unmittelbar nach der Operation und dann alle 3-5 h während der ersten 24 h postoperativen P....
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Diskussion
Die permanente MCA Ligationsmethode gibt gut reproduzierbare Infarktvolumen und erhöhte postoperative Überlebensrate im Vergleich zu anderen Methoden zur Verfügung. Die Leichtigkeit und der kurzen Dauer (~ 30 min) des Verfahrens machen es noch praktischer. Die Methode ist weit verbreitet in Mäusen und Ratten verwendet.
Diese Technik erfordert einen invasiven Chirurgie unter einem Stereomikroskop. Deshalb ist Erfahrung im Betrieb unter einem Mikroskop und Perfektionierung einer erfolgreichen .......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Die chirurgische Technik wurde ursprünglich im Labor von Dr. William D. Hill am Medical College of Georgia erworben. Die Autoren möchten auch Dr. David A. Rempe und Landa Prifti für die Nutzung der Dissektion Kamera danken. Diese Arbeit wurde vom NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 und AHA 30815697D unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| NAMEN | UNTERNEHMEN UND Katalognummer | ||
| A. Solutions and Chemicals | |||
| Povidon-Jod-Lösung, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 | ||
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 | ||
| 2,3,5 Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) | Sigma, T8877 | ||
| 4% Paraformaldehyd | Electron Microscopy Sciences, 159SP | ||
| Phosphate Buffered Saline, pH: 7,4 | Auf und sterilisiert im Labor. | ||
| Mineralöl | PML Microbiologicals, R6570 | ||
| Isofluoran | Der Butler Company, 029405 | ||
| Buprenorphin (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 | ||
| Künstliche Tränen | Der Butler Company, 007312 | ||
| Recovery-Gel | Klare H 2 O, 72-01-5022 | ||
| B. chirurgische Materialien und Geräte | |||
| C57/BL6 Maus, 10-12 Wochen alt | Die Kolonie wurde in der Universitätsstadt Vivarium gezüchtet | ||
| 100% Sauerstoff-Tank | Airgas | ||
| Anästhetika Verdampfer und Durchflussmesser | Surgivet, Modell 100 | ||
| Heizkissen mit Rektalsonde | Feine Science Tools, TR200 | ||
| Präpariermikroskop | Zeiss, Stemi 2000 | ||
| Heizplatte | Petco Services Ltd 0307-013 | ||
| Small Vessel Cauterizer Set | Feine Science Tools, 18000-00 | ||
| Mini Schlauchpumpen | Harvard Apparatus, MPII | ||
| 1ml Spritze | BD, 329650 | ||
| 18G Nadel | Becton Dickinson, 305196 | ||
| Chirurgische 5,0 Nylonnaht | Ethilon, 698H | ||
| Sectioning blockieren | Kent Scientific, 1mm | ||
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 | ||
| Etikettenband | Scienceware, Bel-art Produkte F13463-2075 | ||
| Gazetupfer | Kendall cherheit 2252, Johnson und Johnson 6415 | ||
| Cotton Tip Applikatoren | Puritan 806-WCL | ||
| C. Chirurgie Werkzeuge | |||
| Chirurgische Frühling Schere | Feine Science Tools 15003-08 | ||
| Microdissecting Pinzette abgewinkelt | Feine Science Tools 5 / 45 | ||
| Microdissecting Pinzette gebogen | Feine Science Tools 5 Ti | ||
| Feine gerade Schere | Feine Science Tools 14568-12 | ||
| Gebogene Knochen Rongeur | Feine Science Tools 16021-14 | ||
| Hartman Hemostat Curved | Feine Science Tools 13003-10 |
Tabelle 1. Die Liste der Materialien, Werkzeuge und Chemikalien für die MCA Ligation Verfahren verwendet. A. Solutions and Chemicals, B. chirurgische Materialien und Equipment, C. Surgery Tools.
Referenzen
- Britton, M., Rafols, J., Alousi, S., Dunbar, J. C. The effects of middle cerebral artery occlusion on central nervous system apoptotic events in normal and diabetic rats. Int J Exp Diabesity Res. 4, 13-20 (2003).
- Ciceri, P., Rabuffetti, M., Monopoli, A., Nicosia, S.
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Nachdrucke und Genehmigungen
