Screening-Assay für niedermolekulare Nematizide: Eine Methode mit mittlerem Durchsatz zum Screening potenzieller Nematizide gegen Ditylenchus dipsaci

Abstract

Quelle: Cammalleri, S. R., et al. Kultivierung und Screening des pflanzenparasitären Nematoden Ditylenchus dipsaci. J. Vis. Exp. (2022).

In diesem Video demonstrieren wir einen Screening-Assay, um die Wirksamkeit von niedermolekularen Nematiziden gegen Nematoden zu identifizieren. Nematizide gelten als wirksam, wenn sie nach der Exposition zu einer Abnahme der Anzahl mobiler Nematoden in der Probe führen.

Protocol

Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft

1. In-vitro-Screening kleiner Moleküle

1. Bereiten Sie die Assay-Platten vor, indem Sie die folgenden Schritte ausführen.
   1. Gießen Sie autoklaviertes destilliertes Wasser in einen sterilen Trog und geben Sie mit einer Mehrkanalpipette 40 μl destilliertes Wasser aus dem Trog in jede Vertiefung einer 96-Well-Platte mit flachem Boden ab.
2. Bereiten Sie das Pinning-Tool vor und fügen Sie die Chemikalien hinzu.
   Stellen
   1. Sie Stiftkasse....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
50-ml-Becherglas	Pyrex	CLS100050
96-Well-Platte	Sarstedt	83,3924
Alufolie	Alcan Plus
Umfang des Präparierens	Leica	Leica MZ75
Dmso	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 472301-500ML
Glas-Rutsche	Magna	60-1200
Fusselfreies Löschpapier	V&P Scientific	VP 522-100
Pipettenspitzen mit geringer Retention (200 μl)	LABFORCE	1159M44
Mehrkanal-Pipette	Eppendorf research plus	3125000036
NaOH	Sigma-Aldrich	Nr. S8045-500G
Parafilm	Bemis	PM-996
Lösungen zur Reinigung von Stiften	V&P Scientific	VP110A
Pinner	V&P Scientific	VP381N
Spülwannen für Pinnen	V&P Scientific	VP 421
Reagenzreservoir mit Deckel für Mehrkanalpipetten	Sigma-Aldrich	BR703459
Inkubator zum Schütteln	New Brunswick Scientific	I26