Assay-Techniken

In diesem Video demonstrieren wir einen Assay zum Nachweis des Vorhandenseins von Phospholipase im rohen Giftextrakt von Anthopleura dowii – einer Meeresanemone. Der Assay verwendet eine Agarose-Gel-Diffusionstechnik, bei der das Enzym Phospholipase in das feste Medium eingebaute Phospholipide radial diffundiert und abbaut.

In diesem Video beschreiben wir einen Zellchiralitätsassay, um die Ausrichtungsverzerrung von Zellen in einer begrenzten geometrischen Grenze, wie z. B. einem Ringmikromuster, zu bestimmen. Chiralität ist eine inhärente Eigenschaft der meisten Zelltypen und wird durch genetische und Umweltfaktoren bestimmt. Die Kenntnis der Chiralität einer normalen Zellpopulation kann helfen, medikamentös behandelte Zellen zu screenen.

Dieses Video beschreibt einen kolorimetrischen Assay zur Messung des mitochondrialen Citratsynthase-Aktivitätsassays, der im Gewebehomogenat von Drosophila vorhanden ist.

In diesem Video beschreiben wir eine kolorimetrische Methode zur Bestimmung des Nicht-Häm-Eisengehalts in Lebergewebe von Mäusen. Als chromogenes Substrat wird Bathophenanthrolinsulfonat in Gegenwart eines Reduktionsmittels verwendet, das Eisen(III)-Eisen in chelatables Eisen umwandelt.

Dieses Video zeigt eine Quantifizierungstechnik für CO2, das während der Substratoxidation freigesetzt wird, unter Verwendung von 14C-radioaktiv markierten Substraten. Das freigesetzte 14CO2 wird in einer alkalischen Lösung eingeschlossen und mit einem Szintillationszähler quantifiziert. Die Oxidation verschiedener Substrate variiert von Gewebe zu Gewebe und spiegelt den pathophysiologischen Zustand des Gewebes wider.

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur Untersuchung der Septinorganisation auf einer glasgestützten Lipiddoppelschicht in vitro mittels Totalreflexionsfluoreszenzmikroskopie.

Dieses Video beschreibt die Technik zur Untersuchung der Septin-Protein-Assemblierung auf Mikrosphären, die mit Lipiddoppelschichten beschichtet sind. Diese Technik hilft beim Verständnis der krümmungsabhängigen Anordnungen von Proteinen auf gekrümmten Oberflächen.

In diesem Video demonstrieren wir einen Screening-Assay, um die Wirksamkeit von niedermolekularen Nematiziden gegen Nematoden zu identifizieren. Nematizide gelten als wirksam, wenn sie nach der Exposition zu einer Abnahme der Anzahl mobiler Nematoden in der Probe führen.

In diesem Video beschreiben wir eine Methode zum Nachweis von Osteoblasten-sezernierten Kalziumablagerungen mit einem anionischen Farbstoff, Alizarin Red S. Die kultivierten Osteoblasten werden zuerst gefärbt und dann wird der Farbstoff für die kolorimetrische Quantifizierung von Kalziumablagerungen oder des Grades der Osteoblastenmineralisierung zurückgewonnen.

In diesem Video beschreiben wir den Larvenkontakt-Assay, um die Toxizität des Dopaminrezeptor-Antagonisten Amitriptylin an den Larven von Mücken im dritten Stadium zu bewerten, die als Vektoren mehrerer menschlicher Infektionskrankheiten bekannt sind. Die Beurteilung der Larvenmortalität bei Inkubation mit unterschiedlichen Amitriptylin-Konzentrationen über verschiedene Zeitintervalle hilft bei der Bestimmung der letalen Konzentration 50.

In diesem Video demonstrieren wir den topischen Test-Assay, um die Toxizität eines potenziellen Insektizids auf erwachsene weibliche Mücken zu bestimmen. Unter Verwendung eines Dopaminrezeptor-Antagonisten, der eine tödliche Hemmung der Neurotransmission bei Mücken bewirkt, beschreibt diese Methode eine Möglichkeit, die toxischen Wirkungen von Insektiziden bei topischer Anwendung zu bewerten.

Dieses Video zeigt einen Blutfütterungsassay zur Bewertung der Mortalität und Fruchtbarkeit von Testverbindungen mit neuartigen Wirkungsweisen an weiblichen Mücken. Diese Technik hilft beim Screening neuer Klassen von Insektiziden, um die resistente Population von Mücken abzutöten und die Ausbreitung der Krankheit zu kontrollieren.

In diesem Video demonstrieren wir einen zellbasierten Proteinaggregationsassay mit Proteasom-Inhibitoren, die die Proteasomaktivität blockieren und verhindern, dass fehlgefaltete, mutierte Proteine, die mit einer fluoreszierenden Markierung fusioniert sind, einen Ubiquitin-abhängigen proteasomalen Abbau durchlaufen, was zu ihrer Akkumulation im Zellzytoplasma führt. Anschließend werden die Proteinaggregate mittels Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht und quantifiziert.

Dieses Video zeigt einen schnellen Bioassay zur Untersuchung der Endotoxinaktivität in einer Vollblutprobe mit einer Chemilumineszenz-basierten Methode. Bei diesem Assay handelt es sich um einen schnellen und sensitiven Biomarker-Test für die Frühdiagnose einer Endotoxin-vermittelten Sepsis.

Dieses Video beschreibt das turbidimetrische Format des Limulus-Amöbozyten-Lysat- oder LAL-Assays zur Abschätzung der Endotoxin-Kontamination in PEGylierten liposomalen Doxorubicin-Nanoformulierungen. Die Trübung der Lösung nach der Reaktion des Endotoxins mit dem LAL-Reagenz hilft bei der Abschätzung des Endotoxins in der Probe.

Dieses Video beschreibt einen Gel-Gerinnsel-Assay zur Bestimmung des Vorhandenseins von bakteriellen Endotoxinen in Nanoformulierungen unter Verwendung von Limulus Amöbozyten-Lysat, das aus den Blutzellen von Pfeilschwanzkrebsen gewonnen wird. Der Assay hilft bei der Prüfung auf Endotoxin-Kontamination von pharmazeutischen Produkten, einschließlich nanobasierter Formulierungen.

In diesem Video demonstrieren wir einen Hochdurchsatz-Assay für das Screening kohlenhydrataktiver Enzyme unter Verwendung unlöslicher chromogener Polymer-Hydrogel-Substrate. Das Enzym baut diese Substrate zu einem löslichen farbigen Produkt ab, das durch Messung der Farbintensität des Produkts quantifiziert werden kann.

Dieses Video zeigt einen Assay zum Screening von Enzymen, die beim Abbau komplexer Polysaccharide in pflanzlicher Biomasse unter Verwendung von unlöslicher chromogener Biomasse oder ICB wirksam sind. Die Enzyme hydrolysieren ICB, um lösliche farbstoffgebundene Oligosaccharide freizusetzen, und die Enzymaktivität wird durch kolorimetrische Analyse des Reaktionsprodukts bewertet.

Dieses Video zeigt eine nukleare Färbemethode, um die zytotoxische Wirkung von Mitocan auf medikamentenempfindliche Krebszellen und gesunde Varianten nachzuweisen. Die Doppelfärbung mit DNA-bindenden Farbstoffen wie Propidiumiodid und Hoechst-Farbstoff ermöglicht eine klare Unterscheidung zwischen toten und lebenden Zellen und hilft so, die Zytotoxizität des Medikaments zu beurteilen.

In diesem Video führen wir einen in vitro Motilitätsassay durch, um die Aktin-Myosin-Wechselwirkungen zu analysieren. Die Gleitbewegung von Aktinfilamenten auf immobilisierten Myosinmolekülen wird mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht.

In diesem Video führen wir einen in vitro Motilitätstest durch, um die Aktin-Myosin-Wechselwirkungen zu analysieren. Die Gleitbewegung von Aktinfilamenten auf immobilisierten Myosinmolekülen wird mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht.

Dieses Video zeigt die differentielle radiale Kapillarwirkung des Ligandenassays — eine Technik zum systematischen Hochdurchsatz-Screening von intrazellulären Nukleotid-Second-Messenger-bindenden Proteinen. Diese Technik ermöglicht eine direkte Bindung der Botenstoffe an das überexprimierte Zielprotein im Zelllysat – unter Umgehung der Notwendigkeit einer Proteinreinigung.

Dieses Video beschreibt einen Abbauassay für fehlgefaltete Proteine mittels Cycloheximid-Behandlung zusammen mit Detergenzfraktionierung. Diese Methode hilft dabei, die Dynamik fehlgefalteter Proteine zu untersuchen und die tiefgreifenden Mechanismen des Proteinumsatzes aufzudecken.

Dieses Video beschreibt einen in vitro fluoreszenzbasierten Mikroplatten-Assay, um die Abbaukinetik eines fluoreszenzmarkierten, fehlgefalteten Luciferase-mutierten Proteins zu untersuchen, das in den Zellkernen von transfizierten Säugetierzellen exprimiert wird. Der Assay umfasst die Behandlung von Zellen, die das fluoreszierende mutierte Protein exprimieren, mit einem Translationsinhibitor und einem Proteasom-Inhibitor, um den Proteasom-vermittelten Abbau des fehlgefalteten Proteins zu...

Das Video zeigt den Luciferase-Assay, der zur Quantifizierung von Luciferase-markierten Proteinen verwendet wird. Der Assay verwendet ein künstlich hergestelltes Luciferase-Enzym, das aus einem großen Fragment besteht, das an das kleine Fragment bindet, das mit einem Protein von Interesse konjugiert ist. Die gebundenen Untereinheiten bilden ein aktives Enzym, das in Gegenwart des Substrats ein Lumineszenzsignal freisetzt. Dieses Signal wird dann mit einem Luminometer quantifiziert.

Dieses Video zeigt einen auf Bildgebung basierenden In-vivo-Assay zur Bestimmung des altersbedingten Rückgangs der Proteostase. Der Assay verwendet Caenorhabditis elegans, das Polyglutamin-YFP-Fusionsprotein in der Körperwandmuskulatur exprimiert, um die altersassoziierte Aggregation von Polyglutamin und die Induktion von Proteotoxizität zu messen, die zu Lähmungen führt.

In diesem Video demonstrieren wir den amplifizierten lumineszierenden homogenen Proximity-Assay – einen Bead-basierten Proximity-Assay. Es verwendet homogen große Akzeptor- und Donorkügelchen, die mit zwei Proteinen immobilisiert sind, die dazu neigen, zu interagieren, um potenzielle kleine Moleküle zu screenen, die Proteininteraktionen hemmen.

Dieses Video zeigt einen Assay zur Überwachung der Darmversauerung bei Drosophila-Fliegen. Nach der Einnahme von Lebensmitteln, die mit einem pH-Indikatorfarbstoff ergänzt sind, führt die Ansäuerung des Darmlumens zu einer Veränderung der Farbe des Farbstoffs. Eine visuelle Inspektion des Verdauungstraktes der Fliegen zur Untersuchung der Farbveränderung liefert Hinweise auf eine Übersäuerung.

Dieses Video beschreibt einen auf Plattenlesern basierenden Assay zur Messung der mitochondrialen Kalziumaufnahme in isolierten Mitochondrien. Der Assay analysiert das Fluoreszenzsignal eines kalziumempfindlichen Fluoreszenzfarbstoffs, um die Kinetik der mitochondrialen Kalziumaufnahme und der Kalziumüberladung zu untersuchen.

Dieses Video beschreibt eine kolorimetrische Methode zur Quantifizierung des Gehalts an löslichen Proteinen in pflanzlichen Geweben. Das Verfahren verwendet den Farbstoff Coomassie Brilliant Blue G-250, der mit dem löslichen Protein interagiert, um einen blau gefärbten, stabilen Protein-Farbstoff-Komplex zu bilden, der proportional zum Gehalt an löslichen Proteinen im Gewebe ist.

Dieses Video beschreibt die Methode zur Quantifizierung der in pflanzlichen Geweben vorhandenen verdaulichen Kohlenhydrate. Dies hilft dabei, Daten aus verschiedenen Pflanzengeweben zu sammeln, um die Ernährungsökologie, die Interaktionen zwischen Pflanzen und Pflanzenfressern und die Dynamik des Nahrungsnetzes zu untersuchen.

In diesem Video demonstrieren wir den Luciferase-Assay zur Quantifizierung des Wachstums des intrazellulären Erregers Toxoplasma gondii. Unter Verwendung eines Toxoplasmastamms, der nach der Infektion der Wirtszellen das Luciferase-Enzym exprimiert, wird die Luciferase-Aktivität in der infizierten Zellkultur nachgewiesen, um die erfolgreiche Vermehrung des Parasiten zu bestimmen.

Das Video zeigt den Luciferase-Assay, der verwendet wird, um die Wirksamkeit eines antiparasitären chemischen Inhibitors gegen den intrazellulären Erreger Toxoplasma gondii zu bestimmen.In der Studie dringen Luciferase-exprimierende Parasiten in die Wirtszellen ein, um sich zu replizieren und zu überleben. Der chemische Inhibitor bindet an die Cysteinproteasen des Parasiten und hemmt die Vermehrung. Die nachgewiesene Luciferase-Aktivität ist proportional zu den Faltenveränderungen des...

Dieses Video zeigt ein in vitro Protokoll zur Untersuchung der Msp1-vermittelten Entfernung von fehllokalisierten TA-Proteinen, die in die Lipiddoppelschicht von Liposomen integriert sind. Msp1- und TA-Proteine werden zu Liposomen co-rekonstituiert, und die ATP-abhängige Translokation von TA-Proteinen wird durch Affinitätsreinigung bestätigt.

In diesem Video beschreiben wir eine einfache und robuste Methode zur Bestimmung des zytotoxischen Potenzials eines Trypanozid-Medikaments gegen einen Parasiten, Trypanosoma cruzi, das das Enzym β-Galactosidase exprimiert. β-Galactosidase dient als Indikator für die Zelllyse, und seine Aktivität kann verwendet werden, um die Wirkung des Medikaments zu beurteilen.

In diesem Video demonstrieren wir einen Assay, der die Monoamin-Freisetzungsmechanismen aus den Neuronen von metabolisch aktiven ex vivo Rattenhirnschnitten untersucht, wenn sie mit Testmedikamenten behandelt werden. Der Assay zeigt, dass Neurostimulanzien die Monoaminfreisetzung über die zellulären Monoamintransporter induzieren, während eine hohe KCl-Konzentration eine synaptische Vesikel-Exozytose-vermittelte vesikuläre Monoaminfreisetzung induziert.

Dieses Video beschreibt eine in vivo Methode zum Screening des Schutzpotenzials von neuroprotektiven Testsubstanzen bei der Reduzierung der PolyQ-Aggregation in Körperwandmuskelzellen von Nematoden und zur Verbesserung der Aggregations-assoziierten Proteotoxizität.

In diesem Video beschreiben wir eine Methode zur Bewertung der neuroprotektiven Wirkung einer Testsubstanz, Astragalan, auf das neuronale Überleben bei Caenorhabditis elegans durch polyQ-vermittelte Neurotoxizität. Der Assay verwendet Caenorhabditis elegans, die die abnormal expandierten polyQ-Wiederholungen exprimieren, die mit GFP in ihren ASH-Neuronen fusioniert sind, um das neuronale Überleben nach der Behandlung mit der Testsubstanz zu messen.

Dieses Video beschreibt einen osmotischen Vermeidungsassay zur Untersuchung des Chemovermeidungsverhaltens in einem transgenen Wurmmodell. Das Vermeidungsverhalten wird in einer Platte in Gegenwart einer hochosmotischen Barriere und eines Chemolockstoffs getestet. Die Würmer mit einem Funktionsverlust von Neuronen werden vom Chemolockstoff angezogen, überwinden die hochosmotische Barriere und werden in der Fallenzone durch die Anästhesielösung gelähmt.

Dieses Video beschreibt einen kolorimetrischen Assay zur Laktatmessung in Zelllysaten unter Verwendung des Enzyms Laktatdehydrogenase. Dieses Enzym wandelt Laktat in Pyruvat um, zusammen mit der Umwandlung von NAD in NADH, das mit Tetrazoliumfarbstoffen reagiert und ein farbiges Produkt ergibt, das spektrophotometrisch gemessen werden kann, um das Laktat zu quantifizieren.

Dieses Video beschreibt einen kolorimetrischen Assay zur quantitativen Messung von Pyruvat in den zellulären Fraktionen von Caenorhabditis elegans. Unter Verwendung des Wasserstoffperoxids, das aus der enzymatischen Reaktion der Pyruvatoxidase mit zellulärem Pyruvat hergestellt wird, wird ein chromogener Farbstoff oxidiert, um ein farbiges Produkt herzustellen, das mittels Kolorimetrie gemessen wird, um die Pyruvatkonzentration zu bestimmen.

Dieses Video beschreibt einen spektrophotometrischen Assay zur Abschätzung der Glykogensynthase-Aktivität. Die Methode beruht auf der Verringerung der Absorption von NADH mit der Zeit und zeigt die Aktivität der Glykogensynthase an.

In diesem Video beschreiben wir einen qualitativen spektrophotometrischen Assay, um das Ausmaß der Verzweigung in einer Glykogenprobe mit einer nicht charakterisierten Struktur zu bestimmen. Der Vergleich der Absorptionsmaxima der uncharakterisierten Probe mit denen von Polysacchariden mit bekannten verzweigten Strukturen deutet auf das Vorhandensein von Verzweigungen in der nicht charakterisierten Probe hin.

Dieses Video zeigt den Thiobarbitursäure-Reaktivsubstanzen-Assay (TBARS) zur Beurteilung von oxidativem Stress in biologischen Proben.

Dieses Video zeigt den Split-Luciferase-Komplementationsassay zum Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen. In diesem Assay werden die Proteine von Interesse an kleine und große Fragmente des Luciferase-Enzyms getaggt. Wenn die Proteine interagieren, verbinden sich die großen und kleinen Fragmente zu einem aktiven Enzymkomplex, der in Gegenwart eines bestimmten Substrats eine helle Lumineszenz freisetzt, die gemessen werden kann.

Dieses Video zeigt die Technik zur Entnahme einer Bodenprobe für die Analyse der hydraulischen Eigenschaften. Der Probenahmebereich wird geräumt und die obere Kruste evakuiert. Der Probenahmering wird dann in den Boden gesteckt, um die Probe zu entnehmen. Der Ring mit der Probe wird dann gereinigt, etikettiert, verpackt und ungestört zur Analyse übergeben.

Quelle:Léa Rubira1, Hélène Sturer1, Louise Combette1, Sandra Santini1, Stéphane Renaud1, Cyril Fersing1,21Abteilung für Nuklearmedizin, Institut régional du Cancer de Montpellier (ICM), Univ Montpellier, 2IBMM, Univ Montpellier, CNRS, ENSCMDieses Video zeigt die sichere, kontrollierte Infusion eines Radiopharmakons mit einer Schlauchpumpe mit einem Zweileitungs-Kassettensystem. Der Aufbau umfasst den Anschluss von Kochsalzlösung und Infusionsleitungen, die Positionierung des abgeschirmten...

Source:Anthony J. Yosick1,2, Christine Massie1, Emma Knapp2, Hani A. Awad1,2,31Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, US2Center for Musculoskeletal Research, Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USA3Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USAThe video demonstrates fall-related wrist fractures using human cadaver forearms with varying bone densities. Specimens are standardized by removing upper soft tissue,...

In diesem Video demonstrieren wir einen Assay zur Visualisierung und Quantifizierung der zellulären Aufnahme von extrazellulären Vesikeln oder EVs. Dieser Assay nutzt 3D-Fluoreszenzbildgebung mit einem konfokalen Mikroskop und ermöglicht die Unterscheidung von internalisierten EVs von solchen, die an der Zelloberfläche haften.

Dieses Video beschreibt einen Invasionsassay mit einem Dreikammer-Array, das auf der elektrischen Impedanz basiert. Diese Technik misst das invasive Potenzial von Krebszellen unter dem Einfluss löslicher Faktoren, die von den residenten Stromazellen in Tumormikroumgebungen sezerniert werden.

In diesem Video demonstrieren wir einen Lysostaphin-basierten In-vitro-Enzymschutz-Assay, um die Internalisierung von Staphylococcus aureus in A549-Zellen zu quantifizieren. Der Assay hilft bei qualitativen, quantitativen und charakterisierenden Studien der intrazellulären bakteriellen Last in den Wirtszellen.

In diesem Video beschreiben wir einen in vitro osteoklastischen Resorptionsassay auf Calciumphosphat-beschichteten Zellkulturplatten, die mit mononukleären Osteoklasten aus humanem peripherem Blut kultiviert wurden. Die Osteoklasten bilden einen charakteristischen Aktinring auf der mit Calciumphosphat ummantelten Matrix der Zellkulturplatte und bauen die Matrix innerhalb der Aktinringregion ab, um Calcium- und Phosphationen freizusetzen, was zur Bildung ausgeprägter Resorptionsgruben innerhalb...

In diesem Video beschreiben wir einen Phasentrennungsassay, bei dem intrazelluläre Proteine, die intrinsisch ungeordnete Regionen umfassen, die mit einer lichtempfindlichen Oligomerisierungsdomäne fusioniert sind, durch Blaulicht-Exposition dazu gebracht werden, sich selbst in membranlose flüssigkeitsähnliche Kondensate zu assoziieren.

Dieses Video zeigt einen modifizierten Microcarrier-Beads-basierten Assay, der Perizyten enthält, um die Endothelkeimung in den frühen Stadien der Angiogenese zu untersuchen. Der Assay bietet ein experimentelles In-vitro-Modell zum Verständnis der molekularen Mechanismen der Angiogenese und der Wirkung von anti-angiogenetischen Therapeutika.

Dieses Video beschreibt einen in vitro Assay zur Bestimmung der Calcium-Ionophor-induzierten Hämolyse oder Lyse von roten Blutkörperchen in einer menschlichen Probe. Der Assay misst den Prozentsatz der Hämolyse, indem er das Hämoglobin quantifiziert, das aus geplatzten Erythrozyten freigesetzt wird.

In diesem Video demonstrieren wir den Annexin V Bindungsassay zur Messung des Grades der Eryptosis, des Erythrozyten-programmierten Zelltods, mittels fluoreszierender Annexin V Färbung. Apoptotische Erythrozyten zeigen eine Phosphatidylserin-Translokation vom inneren zum äußeren Segel der Zellmembran, wodurch das Fluorophor-markierte Annexin V an das translozierte Phosphatidylserin bindet und dadurch ein Fluoreszenzsignal aussendet.

Dieses Video zeigt eine in vitro Technik zur Beurteilung der Bioverfügbarkeit von Eisen in komplexen Nahrungsquellen. Die Technik kombiniert die Simulation der menschlichen Verdauung mit der Eisenaufnahme durch differenzierte Caco-2-Zellen. Die intrazelluläre Ferritinbildung fungiert als Marker für die zelluläre Eisenaufnahme.

Dieses Video zeigt einen in vitro Assay zur indirekten Messung der intrazellulären Glukoseaufnahme. Der Assay verwendet ein fluoreszenzmarkiertes Glukoseanalogon, um eine Korrelation zwischen der extrazellulären Glukoseverarmung und der intrazellulären Glukoseaufnahme herzustellen.

In diesem Video demonstrieren wir eine ex vivo-Technik zur Messung der extrazellulären Glukoseanaloga-Depletion in entnommenen Mausorganen. Dabei wird das Mausgewebe in einer Lösung inkubiert, die fluoreszenzmarkierte Desoxyglukose enthält, die von den Zellen aufgenommen wird. Die Glukoseanalogonaufnahme kann indirekt durch Messung der Fluoreszenz des inkubierten Mediums bestimmt werden.

Dieses Video beschreibt die Messung der Kontraktion der Aorten-Glattmuskelzellen (SMC) mit Hilfe der elektrischen Zell-Substrat-Impedanzmessung (ECIS). ECIS misst die Fortbewegung von Zellen und ist eine zuverlässige Methode zur Messung von Kontraktionen.

In diesem Video beschreiben wir eine in vitro Methode, um das allergische Potenzial eines Antigens zur Induktion der basophilen Degranulation zu bewerten. β-Hexosaminidase wird als Index für die Freisetzung chemischer Mediatoren verwendet, und die Enzymaktivität von β-Hexosaminidase wird mit einem fluorogenen Substrat gemessen.

In diesem Video demonstrieren wir einen schnellen Assay mit einmaliger Addition zur Beurteilung der Zellviabilität in patienteneigenen Organoiden nach der Behandlung mit einem Testmittel, bei dem intrazelluläre ATP-Spiegel als Marker für die zelluläre Stoffwechselaktivität verwendet werden. Die intrazellulären ATP-Spiegel werden mit Hilfe der Luciferase/Luciferin-Reaktion gemessen, wobei die emittierte Lichtintensität die zelluläre Lebensfähigkeit und damit die wachstumshemmende Wirksamkeit des...

Dieses Video beschreibt die Technik zur Visualisierung von oxidativem Stress in kultivierten Organoiden. Diese Arbeit hilft dabei, das Ausmaß des oxidativen Stresses aufgrund der ROS-Akkumulation in den verschiedenen Zelltypen zu verstehen, die in einem Organoid nach der Behandlung mit verschiedenen ROS-Modulatoren vorhanden sind.

Dieses Video zeigt einen Durchflusszytometrie-Assay zur Quantifizierung der ROS-Spiegel in 3D-Darmorganoiden, die von GFP-exprimierenden transgenen Mäusen gewonnen wurden. Diese Methode bietet ein experimentelles In-vitro-Modell, um die Wirksamkeit von Testverbindungen auf die ROS-Produktion zu untersuchen.

In diesem Video demonstrieren wir eine Methode, um die Wirkung von Osmolyten auf die Bildung von bakteriellen Persisteren zu bewerten. Die Bakterienzellen werden zunächst Osmolyten ausgesetzt, um osmotischen Stress zu induzieren, was die Bildung von Persistern auslöst, und dann mit Antibiotika behandelt, um die Persister aufzuzählen.

Dieses Video zeigt eine auf Fluoreszenzmikroskopie basierende Methode zur Untersuchung der bakteriellen Konkurrenz auf Einzelzellebene. Diese Methode ermöglicht Einblicke in die Struktur und Funktion von Bakteriengemeinschaften.

Dieses Video beschreibt den Virus-Plaque-Assay des infektiösen Herpes-simplex-Virus oder HSV. Die verdünnten Viruspartikel werden in die Monoschicht der Epithelzellen geimpft. Bei der Inkubation bildet das Virus Plaques und wird visuell gezählt, um den infektiösen Virustiter zu bestimmen.

In diesem Video wird der TUNEL-Assay durchgeführt, um das Vorhandensein von apoptotischen Zellen in einer Probe nachzuweisen. In der Studie wird eine spezielle DNA-Polymerase - terminale Desoxynukleotidyltransferase - verwendet, die die Hinzufügung von markierten dUTPs an den 3'-Terminus der fragmentierten DNA katalysiert, was unter einem Fluoreszenzmikroskop beobachtet und identifiziert werden kann.

Dieses Video beschreibt einen in vitro Caspase-3/7 Lumineszenz-Assay zur Quantifizierung von Zelltod oder Apoptose. Der Assay misst die Lumineszenz, die nach der Caspase-3/7-Spaltung eines prolumineszierenden DEVID-Substrats erzeugt wird. Die erzeugte Lumineszenz ist proportional zur Caspase-3/7-Aktivität.

Dieses Video demonstriert eine Immunfärbetechnik, um die apoptotische Zellverschlingung in den homogenisierten embryonalen Zellen von Drosophila melanogaster sichtbar zu machen. Diese Methode ermöglicht Einblicke in die zelluläre Physiologie, indem sie das Ausmaß des apoptotischen Zellengulfments bestimmt.

In diesem Video demonstrieren wir den Efferozytose-Assay, um die Clearance apoptotischer Zellen mittels konfokaler Mikroskopie zu untersuchen. Die Efferozytose ist ein mehrstufiger Prozess, bei dem apoptotische Zellen von Fresszellen verschlungen und in Vesikel, den sogenannten Efferosomen, abgebaut werden. Dieses Protokoll bietet eine Methode zur Visualisierung internalisierter und nicht-internalisierter Teile einzelner apoptotischer Zellen und zur Quantifizierung der Efferozytose.

In diesem Video zeigen wir, dass in Gegenwart eines Phosphodiester-Inhibitors der Eizellzyklus an der Prophase-I gestoppt wird, während der transkribierte mRNAs ohne Translation gespeichert werden. Nach der Freisetzung des Inhibitors wird die Eizellreifung fortgesetzt und die Zellen treten in die Metaphase ein. Das Signal der Reporter-mRNA, die in der Metaphase-I mit dem Zielgen fusioniert ist, deutet auf die Aktivierung der Translationsmaschinerie und der Proteinexpression hin.

Dieses Video beschreibt einen fluorometrischen In-vitro-Assay zur Bewertung der Auswirkungen von künstlichen Tränenformulierungen auf die zelluläre Stoffwechselaktivität von Hornhautepithelzellen unter Verwendung von Resazurin-basierter Alamarblau-Lösung. Eine ungiftige Formulierung hält die Zellen in einem gesunden, metabolisch aktiven Zustand und erleichtert die Reduktion von Resazurin in ein stark fluoreszierendes Resorufin.

Dieses Video beschreibt einen auf konfokaler Mikroskopie basierenden Assay zur Messung der mitochondrialen Kalziumaufnahme in kultivierten Zellen. Der Assay verwendet den calciumsensitiven Fluoreszenzfarbstoff Rhod-2/AM zur Messung des mitochondrialen Calciums in permeabilisierten kultivierten Zellen.

Dieses Video diskutiert den Fluoreszenz-Leckage-Assay, um die Wechselwirkungen von zellpenetrierenden Peptiden mit Zellmembranen unter Verwendung von Zellmembran-Nachahmungen zu untersuchen - große unilamelläre Vesikel oder LUVs, die mit einem Fluoreszenzfarbstoff und einem Quencher verkapselt sind.

Dieses Video zeigt eine Assay-Technik zur Beurteilung der Verkalkung der interstitiellen Zellen der Aortenklappe in vitro. Der Assay hilft bei der Quantifizierung der Calciumkonzentration mit dem Arsenazo III-Reagenz, einem calciumsensitiven Farbstoff, der mit Calciumionen reagiert und einen violett gefärbten Calcium-Arsenazo-Komplex bildet.

Dieses Video beschreibt die Technik zur Aufzeichnung der epileptiformen Aktivität von organotypischen Schnitten aus rhinaler Kortex-Hippocampus ex vivo mittels Elektrophysiologie oder EEG-Aufbau. Dies hilft, die Dynamik und das Fortschreiten der Epileptogenese zu untersuchen und potenzielle therapeutische Ziele zur Behandlung von Epilepsie zu ermitteln.

Dieses Video beschreibt einen berührungslosen Co-Kultur-Wundheilungsassay, um die Migrationskapazität von murinen Myoblasten zu bewerten. Dies hilft, die signalsendenden und signalempfangenden Komponenten der parakrinen nicht-kanonischen Wnt-Signalwechselwirkungen in vitro zu verstehen.

Das Video zeigt den Kometen-Assay zum Nachweis von DNA-Schäden nach Exposition gegenüber schädlichen Stoffen. Unter alkalischen Bedingungen wickelt sich die DNA ab und denaturiert, und bei der Elektrophorese wandern die unbeschädigte und die beschädigte DNA unterschiedlich im Agarosegel und bilden eine kometenförmige Struktur. Die langsam wandernde unbeschädigte DNA bildet den kreisförmigen Kometenkopf, während die schnell wandernden beschädigten DNA-Fragmente den länglichen Kometenschweif...

Dieses Video zeigt eine in vitro Technik zur Abschätzung der Aminosäureaufnahme durch Stromazellen aus dem Knochenmark. Na+-abhängige Aminosäuretransporter vermitteln die Aufnahme von radioaktiv markierten Aminosäuren in den Zellen, und die zelluläre Aufnahme wird durch Messung der Radioaktivität geschätzt.

In diesem Video demonstrieren wir den Prozess der Echtzeitüberwachung zellulärer Ereignisse, einschließlich der Proliferation adhärenter Zellen, über einen zellulären Impedanzassay. Dabei wirken die adhärenten Zellen als Isolatoren, die den Stromfluss zwischen den Elektroden begrenzen und die Impedanz erhöhen.

In diesem Video diskutieren wir die Korrelation zwischen dem CIT50 und der Vielzahl von Virusinfektionen. Die virusinfizierten Zellen zeigen zytopathische Wirkungen, die zu ihrem Tod und ihrer Ablösung von der Goldmikroelektrode führen, was wiederum die Impedanz verringert.

Dieses Video beschreibt eine zelluläre Impedanz-basierte Technik, um die Überlebenskinetik von Viren zu untersuchen, die zytopathische Effekte induzieren. Die Methode misst die elektrische Impedanz von virusinfizierten adhärenten Zellen, die mit Kochsalzlösung vorbehandelt wurden.

Dieses Video zeigt die Entwicklung eines ex vivo-Modells der Aderhautkeimung zur Untersuchung der okulären mikrovaskulären Angiogenese. Der Assay umfasst die Kultivierung von Mausaugen-Explantaten, die das Aderhautgewebe enthalten, das an der Sklera und dem retinalen Pigmentepithel befestigt ist, unter bestimmten Bedingungen, die das keimende choroidale mikrovaskuläre Keimen fördern.

Dieses Video beschreibt einen zellbasierten Reporter-Assay zur Bestimmung der östrogenen Aktivität von pflanzlichen Verbindungen. Eine Verbindung mit östrogenähnlicher Aktivität ahmt ihre Bindung an Östrogenrezeptoren nach und treibt die nachgeschaltete Transkription von Reporterenzym-Genen voran. Das Reporterenzym erzeugt in einer Reaktion Biolumineszenz, was auf die östrogene Aktivität der Verbindung hinweist.

Dieses Video beschreibt den zeitaufgelösten Förster-Resonanzenergietransfer oder TR-FRET-Assay zur Bestimmung der endogenen Proteinphosphorylierung mit Hilfe von Donor- und Akzeptorfluorophoren, die auf Antikörpern markiert sind, die für ein Testprotein spezifisch sind. Diese Technik wurde entwickelt, um die Phosphorylierung von Testproteinen in Zelllysaten zu messen.

In diesem Video beschreiben wir eine auf Lumineszenz basierende Methode, um die Neurotoxizität von Neuritenauswuchs fördernden niedermolekularen Verbindungen auf die Lebensfähigkeit von hNPC-abgeleiteten Neuronen zu bewerten. Der Assay misst den intrazellulären ATP-Spiegel, einen Indikator für die Lebensfähigkeit der Zellen, um die Neurotoxizität nach der Behandlung mit der Testsubstanz zu bewerten.

Dieses Video zeigt die Radiofrequenz-Echographie-Multispektrometrie (REMS) zur Beurteilung der Knochenmineraldichte (BMD). Der Patient wird in Rückenlage gelagert und das Ultraschallgel auf den Schenkelhals, eine frakturanfällige Stelle im Oberschenkelknochen, aufgetragen. Die Sonde sendet dann Ultraschallwellen aus, die mit einer von der BMD beeinflussten Geschwindigkeit vom Knochengewebe reflektiert werden. Die Sonde erfasst diese reflektierten Wellen und ermöglicht so die Quantifizierung der...

Dieses Video zeigt die perkutane Aspiration von Nebenhodenspermien bei einem Patienten mit Azoospermie, einer Erkrankung, die durch das Fehlen von Spermien im Sperma gekennzeichnet ist. Das Verfahren umfasst die Desinfektion des Hodensackbereichs, das Absaugen von Nebenhodenflüssigkeit mit einer Spritze mit einer speziellen Kulturlösung und die Aufbereitung der entnommenen Probe, um lebensfähige Spermien zu isolieren. Die vorbereiteten Spermien sind dann bereit für den Einsatz in...

Quelle:Elettra Leo1, Luiza H.D. Cardoso1, Sabine Schmitt1, Erich Gnaiger11Oroboros InstrumenteIn diesem Video wird erklärt, wie der Sauerstofffluss zur Beurteilung der mitochondrialen Atmung in lebenden und permeabilisierten Säugetierzellen verwendet wird. Es zeigt die sequentielle Verwendung von Digitonin, metabolischen Substraten, ADP, einem Entkoppler und einem Inhibitor zur Charakterisierung verschiedener respiratorischer Zustände. Das resultierende Sauerstoffflussprofil zeigt die...

Dieses Video beschreibt eine Immunoassay-Technik, bei der fluoreszierende magnetische Kügelchen oder Mikrosphären in Verbindung mit verschiedenen Antigenen verwendet werden, um gleichzeitig verschiedene Antikörper-Isotypen in einer Serumprobe nachzuweisen. Der Assay ist hilfreich, um die Serokonversion während einer Infektion oder nach der Impfung zu verstehen.

In diesem Video zeigen wir einen Immunpräzipitationsassay, den sogenannten VLP-Capture-Assay, um antigenanzeigende virusähnliche Partikel (VLPs) aus einer Probe zu isolieren. Das Antigen bindet an spezifische Antikörper, die an magnetische Kügelchen gebunden sind, und bildet einen immobilisierten Antigen-Antikörper-Komplex, der später getrennt und für die weitere Analyse gelagert wird.

Dieses Video demonstriert eine empfindliche Quantifizierungstechnik der Proteinphosphorylierung mit einem Einzelmolekül-Pull-Down-Assay. Die Funktionalisierung von Polyethylenglykol-Biotin und die Verwendung von markierten Antikörpern erhöht den Nachweis von phosphoryliertem Tyrosin mit Spezifität.

Dieses Video demonstriert die in vitro Methode zur SUMOylierung von Substratproteinen unter Verwendung einer sequentiellen Enzymkaskade. Weiterhin wird der SUMOylierte Status des Proteins mit Hilfe der Elektrophorese- und Immunblotting-Technik identifiziert.

In diesem Video zeigen wir den auf dem HiBit-RBD-Bioreporter-System basierenden Assay zum Nachweis von SARS-CoV-2-neutralisierenden Antikörpern. Dieses System zielt auf die virale RBD-Domäne ab, indem es ein biolumineszierendes Reportersystem verwendet, das HiBiT enthält, das mit der RBD-Domäne fusioniert ist.

In diesem Video demonstrieren wir einen kolorimetrischen In-vitro-Assay zum Nachweis des Vorhandenseins von neutralisierenden Antikörpern gegen alkalische Phosphatase-exprimierende rekombinante Adeno-assoziierte Virus-Serotyp 6 (rAAV6)-Vektoren in Schafserumproben. Der Assay nutzt die Reaktion zwischen dem AAV, das für ein menschliches plazentares alkalisches Phosphatase-Gen kodiert, und seinem Substrat, um ein unlösliches violettes Produkt zu erzeugen.

Dieses Video zeigt einen hochsensitiven Immunfluoreszenz-basierten Assay zum Nachweis von PM2,5-induzierten oxidativen Schäden im Herzen von Zebrafischembryonen durch Messung der Spiegel von 8-OHdG und γH2AX, die auf DNA-Schäden bzw. Doppelstrang-DNA-Brüche hinweisen.

Dieses Video demonstriert die Technik zur Beurteilung des neuronalen Todes in organotypischen Schnitten des rhinalen Kortex-Hippocampus. Der neuronale Tod erfolgt durch sich entwickelnde epileptische Anfälle – ähnlich der In-vivo-Epilepsie – und wird durch doppelte Färbung der toten Zellen mit Propidiumiodid und Immunfluoreszenz nachgewiesen.

Dieses Video demonstriert den Nachweis von chemisch konjugierten Antikörper-Antigen-Komplexen mit Hilfe der Sandwich Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Technik. Der eingefangene Antikörper bindet an das spezifische Epitop des Antigens des Antikörper-Antigen-Konjugats, das später mit einem enzymgebundenen Sekundärantikörper sichtbar gemacht werden kann.

In diesem Video demonstrieren wir einen EGFP-basierten Immunfluoreszenz-Assay, um die Wirksamkeit von Zielproteinen auf das Neuritenwachstum primärer kortikaler Neuronen zu identifizieren. Die primären Neuronen werden mit einem fluoreszierenden Protein, EGFP, und einem Zielprotein transfiziert, und dann wird ein Immunoassay durchgeführt, um die Wirkung des Zielproteins auf das Neuritenwachstum zu untersuchen.

In diesem Video demonstrieren wir den Elektrochemilumineszenz-Immunoassay zur Quantifizierung von Zielproteinkonzentrationen in verschiedenen Proben. Dieser Assay basiert auf der Lumineszenz, die bei der elektrochemischen Reaktion erzeugt wird. Die Intensität des emittierten Lichts ist proportional zur Menge des Zielproteins in der Probe.

Das Video beschreibt die Vorbereitung einer Gewebeprobe für die bildgebende Massenzytometrie. Das Gewebe wird zunächst aufbereitet, um die Antigen-Epitope zu demaskieren, die Zellen zu permeabilisieren und unspezifische Antikörper-Bindungsstellen zu blockieren. Dann wird das Gewebe mit einem metallkonjugierten Antikörpercocktail und einer Kernfärbung inkubiert. Abschließend wird die behandelte Gewebeprobe mit einem optischen Scanner abgebildet.

Dieses Video zeigt die Herstellung von hochwertigem plättchenreichem Plasma (PRP) durch Screening der Thrombozytenzahl, Entnahme und Zentrifugation von Blut und Isolierung von Blutplättchen. Dieses PRP wird in therapeutischen Anwendungen zur Geweberegeneration und -heilung eingesetzt.