Hämolyse-Assay: Eine In-vitro-Methode zur Messung der Calcium-Ionophor-induzierten Lyse in menschlichen Erythrozyten

Zusammenfassung

Quelle: Bigdelou, P. et al., Induktion von Eryptose in roten Blutkörperchen mit einem Kalziumionophor. J. vis. exp. (2020).

Dieses Video beschreibt einen in vitro Assay zur Bestimmung der Calcium-Ionophor-induzierten Hämolyse oder Lyse von roten Blutkörperchen in einer menschlichen Probe. Der Assay misst den Prozentsatz der Hämolyse, indem er das Hämoglobin quantifiziert, das aus geplatzten Erythrozyten freigesetzt wird.

Protokoll

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

1. Isolierung von Erythrozyten aus Vollblut

1. 500 μl Vollblut in saurer Citratdextrose (ACD) (bei 4 °C gelagert) in ein Mikrozentrifugenröhrchen geben.
   Anmerkung: Vollblut wurde bei ACD gekauft. Nach Angaben des Unternehmens werden 1,5 ml ACD zu 7 ml Vollblut (8,5 ml Gesamtvolumen) hinzugefügt.
2. Zentrifugieren Sie das Vollblut bei 700 x g für 5 mi....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
96-Well-Platte	Fisher Scientific	Tel.: 12-565-331
CaCl2	Fisher Scientific	Nr. C79-500
Zentrifuge	Millipore Sigma	Nr. M7157	Modell Eppendorf 5415C
Dmso	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 472301-100ML
Glukose-Monohydrat	Sigma-Aldrich	Y0001745
HEPES-Puffer (1 m)	Fisher Scientific	Tel.: 50-751-7290	Bei 4 °C lagern
Ionomycin-Calciumsalz	EMD Milipore Corp.	Artikel-Nr.: 407952-1MG	In DMSO auflösen, um 2 mM zu erreichen. Bei -20 °C lagern
Kcl	Fisher Scientific	Nr. P330-500
MgSO4	Fisher Scientific	M65-500
Mikrozentrifugenröhrchen	Fisher Scientific	Tel.: 02-681-5
NaCl	Fisher Scientific	Nr. S271-500
Synergy HFM Mikroplatten-Reader	BioTek
Vollblut bei ACD	Zen-Biografie		Bei 4 °C lagern und vor Gebrauch auf 37 °C erwärmen