Der Phagozytose-Assay: eine Immunfärbetechnik zur Visualisierung des apoptotischen Zellengulfments in den embryonalen Zellen von Drosophila melanogaster

Zusammenfassung

Quelle: Nonaka, S. et al. Phagozytose-Assay für apoptotische Zellen in Drosophila-Embryonen. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video demonstriert eine Immunfärbetechnik, um die apoptotische Zellverschlingung in den homogenisierten embryonalen Zellen von Drosophila melanogaster sichtbar zu machen. Diese Methode ermöglicht Einblicke in die zelluläre Physiologie, indem sie das Ausmaß des apoptotischen Zellengulfments bestimmt.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Färbung von Hämozyten

1. Immunfärbung mit einem Anti-Croquemort-Antikörper
   1. Die Objektträger werden 10 Minuten lang nacheinander in Methanol, 10 Minuten lang in PBS mit 0,2 % (v/v) Triton X-100 und anschließend 10 Minuten lang in PBS eingeweicht.
   2. 20 μl 5 % (v/v) Schweinevollkornserum in PBS mit 0,2 % (v/v) Triton X-100 auf Zellen zur Blockierung aufsetzen. Inkubieren Sie die Objektträger 20 Minuten lang bei Raumtemperatur.
   3. Entfernen Sie die....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Serum für ganze Schweine	MP Biomedizin	Artikel-Nr.: 55993	Zum Blockieren
Kpl Anti-Ratte IgG (H+L) ab MSA, AP	KPL	Nr. 475-1612	Sekundärantikörper zur Färbung von Hämozyten mit einem Anti-Croquemort-Antikörper
5-Brom-4-chlor-3-indolylphosphat	Roche	11383221001	BCIP, Zur Färbung von Hämozyten
Nitroblau, Tetrazolium	Roche	11383213001	NBT, Zur Färbung von Hämozyten
Anti-Croquemort-Antikörper			zuvor beschrieben in Manaka et al., J. Biol. Chem., 279, 48466-48476
Apop Tag Peroxidase In-situ-Apoptose-Nachweiskit	Millipore	Nr. S7100	Zur Färbung von apoptoitschen Zellen. Dieses Kit enthält einen Äquilibrierungspuffer, einen Reaktionspuffer, einen STOP/Wash-Puffer, ein TdT-Enzym und eine Anti-Digoxigenin-Peroxidase.
3,3'-Diaminobenzidintetrahydrichlorid	Nacalai Tesque	Nr. 11009-41	DAB, Zur Färbung von apoptoitschen Zellen