Assay zur Überwachung der Darmsäuerung: Eine Technik zur Untersuchung der Ansäuerung des Darmlumums bei Drosophila mit dem Farbstoff Bromphenolblau

Zusammenfassung

Quelle: Abu, F., et al. Überwachung der Darmübersäuerung im erwachsenen Drosophila-Darm. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video zeigt einen Assay zur Überwachung der Darmversauerung bei Drosophila-Fliegen. Nach der Einnahme von Lebensmitteln, die mit einem pH-Indikatorfarbstoff ergänzt sind, führt die Ansäuerung des Darmlumens zu einer Veränderung der Farbe des Farbstoffs. Eine visuelle Inspektion des Verdauungstraktes der Fliegen zur Untersuchung der Farbveränderung liefert Hinweise auf eine Übersäuerung.

Protokoll

HINWEIS: Als WEA-Steuerung wurde die Standard-Laborlinie Oregon R verwendet. Alle Fliegen wurden auf Standard-Maismehl-Melasse-Medium (mit Melasse, Agar, Hefe, Maismehl, Tegosept, Propionsäure und Wasser) bei Raumtemperatur mit 12/12 h Hell-Dunkel-Zirkadianz-Rhythmus aufgezogen.

1. Vorbereitung auf den Assay

1. Weibliche Fliegen (0-2 Tage alt, nicht jungfräulich) unter CO₂ -Anästhesie sammeln und mindestens 3 Tage vor den Experimenten auf Standard-Maismehlfutter erholen lassen.
2. Hungern Sie die Fliegen für ~24 h bei Raumtemperatur (~23 °C) in Fläschchen mit einem Labortuch, das mit ~2 mL deionis....

Ergebnisse

Abbildung 1: Überwachung der Darmsauerung.(A) Schematische Darstellung der Fütterungsarena. Der blaue Punkt steht für Fliegenfutter mit Bromphenolblau (einem Farbstoff, der den pH-Wert anzeigt). Andere Flecken stellen Fruchtfliegen dar. (B) Grafische Darstellung des Prozentsatzes der Fliegen mit Darmversauerung, die über einen Zeitraum von 4 Stunden unterschiedlic.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Bromphenolblau	Sigma-Aldrich		Nr. B0126
D. simulans	Drosophila Species Stock Center an der University of California		Riverside, Kalifornien1 (https://www.drosophilaspecies.com/)
D. erecta	Drosophila Species Stock Center an der University of California		Dere cy1(https://www.drosophilaspecies.com/)
D. pseudoobscura	Drosophila Species Stock Center an der University of California		Eugene, Oregon(https://www.drosophilaspecies.com/)
D. mojavensis	Drosophila Species Stock Center an der University of California		Chocolate Mountains, Kalifornien (https://www.drosophilaspecies.com/)
Zange	Inox Biologie		Katalog# 11252-20
Kim wischt Taschentücher	Kimtech
Oregon R	Bloomington Drosophila Aktie		(https://bdsc.indiana.edu/ # 2376)
Petrischalen	Fisher Scientific		Katalog #FB0875713A
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	HyClone		Katalog # SH30258.01
stereomikroskop	Olympus SZ51		Visuelle Vergrößerung

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