Elektroenzephalographie-basierte Aufzeichnungstechnik zur Aufzeichnung der epileptiformen Aktivität

Zusammenfassung

Quelle: Carvalho, M. et al., Ein Modell der Epileptogenese in organotypischen Schnittkulturen des rheinischen Cortex-Hippocampus. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video beschreibt die Technik zur Aufzeichnung der epileptiformen Aktivität von organotypischen Schnitten aus rhinaler Kortex-Hippocampus ex vivo mittels Elektrophysiologie oder EEG-Aufbau. Dies hilft, die Dynamik und das Fortschreiten der Epileptogenese zu untersuchen und potenzielle therapeutische Ziele zur Behandlung von Epilepsie zu ermitteln.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Vorbereitung von Schnitten aus dem rhinalen Kortex und dem Hippocampus

HINWEIS: Für die Herstellung von rhinalen Cortex-Hippocampus-Schnitten werden P6-7 Sprague-Dawley-Ratten verwendet.

1. Aufbau der Kultur und Vorbereitung des Mediums
   1. Bereiten Sie am Tag vor der Kultur die benötigten Medien vor und stellen Sie sie auf 4 °C.
   2. Bereiten Sie das Seziermedium vor: 25 mM Glukose in Gey's Balanced Salt Solution ....

Ergebnisse

Abbildung 1: Detailliertes Verfahren zur Präparation von organotypischen Schnitten der rheinischen Hirnrinde-Hippocampus. (A) Das Gehirn wird vom Kopf entfernt und mit der dorsalen Oberfläche nach oben in ein eiskaltes GBSS gelegt. (B) Führen Sie die Pinzette in das Kleinhirn ein. Öffnen Sie das Gehirn durch die Mittellinie und entfernen Sie das überschüssige Gewe.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Künstliche Zerebrospinalflüssigkeit (aCSF)			selbstgemacht
B-27™ Supplement (50X), serumfrei	Thermo Fisher Scientific	Artikel-Nr.: 17504-044
Klingen für Skalpellgriff	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Artikel-Nr.: 10011-00
Rinderserumalbumin (BSA)	NZYTech	MB04602	5% BSA wird verwendet, um die primären Antikörper zu verdünnen. Fügen Sie 0,5 g BSA in 10 mL PBS hinzu.
-/Gewebe-Scheibenkammer-System	Warner Instruments
Zellkultureinsätze, 30 mm, hydrophiles PTFE	Millipore SAS	PICM03050
Konventioneller Inkubator	Thermo Scientific Heraeus	BB15, Funktionslinie	Eingestellt auf 37 °C und 5 % CO2
Geys ausgewogene Salzlösung (GBSS)	Biologische Industrien	01-919-1A
Glas-Elektroden	Wissenschaftliche Produkte	GB150F-10	Runde Spitzen selbstgemacht
Interface-Kammer	Warner Instruments	BSC-HT Haas Top
Irisspatel gebogen	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 10092-12
Reinigungspapier für Linsen	VERSTEIFUNG
L-Glutamin Lösung 200 mM (Q)	Thermo Fisher Scientific	Artikel-Nr.: 25030-024
Zerkleinerer für Gewebe	Das Mickle Laboratory Engineering CO. LTD.	MTC/2	Auf 350 μm eingestellt

Gehirn