Untersuchung des Chemovermeidungsverhaltens bei transgenen Würmern mit Hilfe eines osmotischen Vermeidungsassays

Abstract

Quelle: Wang, Q. et al., Z. Caenorhabditis elegans als Modellsystem für die Entdeckung bioaktiver Verbindungen gegen Polyglutamin-vermittelte Neurotoxizität. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video beschreibt einen osmotischen Vermeidungsassay zur Untersuchung des Chemovermeidungsverhaltens in einem transgenen Wurmmodell. Das Vermeidungsverhalten wird in einer Platte in Gegenwart einer hochosmotischen Barriere und eines Chemolockstoffs getestet. Die Würmer mit einem Funktionsverlust von Neuronen werden vom Chemolockstoff angezogen, überwinden die hochosmotische Barriere und werden in der Fallenzone durch die Anästhesielösung gelähmt.

Protocol

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

HINWEIS: Siehe Tabelle 1 für die Rezepte der Lösungen, die in diesem Protokoll verwendet werden.

>1. Vorbereitung der Materialien für den Caenorhabditis elegans-Test

1. Pflege von C. elegans-Stämmen
   1. Beziehen Sie die Stämme C. elegans (AM141 und HA759) und Escherichia coli (OP50 und NA22) (siehe Materialtabelle).
   2. Halten Sie ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
C. elegans-Stämme
HA759 rtIs11 [osm-10p::GFP + osm-10p::HtnQ150 + dpy-20(+)]	Caenorhabditis Genetikzentrum (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/HA759
E. coli-Stämme
NA22	Caenorhabditis Genetikzentrum (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/NA22
OP50	Caenorhabditis Genetikzentrum (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/OP50
Reagenz
Agar	Verifizierter Lieferant - Shanghai EKEAR Bio-Technology Co., Ltd.	EQ1001-500G	https://www.ekear.com
Butandion	Verifizierter Lieferant - Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.	80042427	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/d027c00e64c9404d9aa41391fbb 595d0
Cholesterin	Sigma-Aldrich	Nr. C8667	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/sigma/c8667?context=product
Glycerin	Aladdin Co., Ltd.	G116203	https://www.aladdin-e.com/zh_cn/g116203.html
Pepton	Guangdong HuanKai Mikrobielle Wissenschaft und Technologie Co., Ltd.	050170B	https://www.huankai.com/show/21074.html
Natriumazid	Verifizierter Lieferant - Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.	80115560	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/5e981aa807664e26af 551e96ff5f07cd
Natriumhydroxid	Verifizierter Lieferant - Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.	10019718	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/450dfdb1132a4d8a817 d3d8c68ec25e6
Natriumhypochlorit-Lösung	Fabrik für chemische Reagenzien in Guangzhou	Artikel-Nr.: 7681-52-9	http://www.chemicalreagent.com/product/DetailProduct.aspx?id=125
Trypton	Oxoid GmbH	LP0042B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0042B#/LP0042B
Hefeextrakt	Oxoid GmbH	LP0021B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0021B#/LP0021B
Ausrüstung
48-Well-Zellkulturplatte	Verifizierter Lieferant - Nest Biotechnology Co., Ltd.	748001	https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85
90 mm Petrischale	Verifizierter Lieferant - Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	F611003	https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F611003
Autoklav	Panasonic	MLS-3781L-PC
Präpariermikroskop	Verifizierter Lieferant - ChongQing Optical Co., Ltd.	ZSA0745	http://www.coicuop.com/plus/view.php?aid=64
Mikrozentrifuge	GeneCompany	GENESPEED X1	https://www.genecompany.com/index.php/Home/Goods/goodsdetails/gid/189.html
Parafilm M	Sigma-Aldrich	Nr. P7793-1EA	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/en/product/sigma/p7793?context=product
Mixbecher	Zhicheng Inc.	ZWY-2102C	http://www.zhicheng.net/Product/0865291356.html