Wundassay zur Bewertung der Migrationskapazität von murinen Myoblasten in Co-Kultur

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Toubat, O. et al., Modellierung der parakrinen nichtkanonischen Wnt-Signalgebung in vitro. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video beschreibt einen berührungslosen Co-Kultur-Wundheilungsassay, um die Migrationskapazität von murinen Myoblasten zu bewerten. Dies hilft, die signalsendenden und signalempfangenden Komponenten der parakrinen nicht-kanonischen Wnt-Signalwechselwirkungen in vitro zu verstehen.

Protokoll

1. Untersuchung von Wunden:

(Abbildung 1 zeigt das schematische Modell des Assays)

Lassen Sie die O9-1-Zelleinsätze und die C2C12-Zellkammer-Wells im Inkubator anhaften und proliferieren, bis beide Zellen eine Konfluenz von ~70-80 % erreicht haben, bevor Sie mit diesem Teil des Protokolls fortfahren. Wenn Zellen >90 % konfluent wachsen, fahren Sie nicht mit dem Scratch-Assay fort, da sich die Zellen lediglich von der Vertiefung lösen.
Erwärmen Sie 1x PBS und C2C12 Medium, indem Sie sie in ein 37 °C warmes Wasserbad legen.
Entfernen Sie das überstehende Medium aus der C2C12-Kammervertiefung un....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Schematisches Modell des Assays.Schritt 1 umfasst die in vitro Expansion von C2C12-Myoblasten und NCCs mit Hilfe von STO-Feeder-Zellen. Schritt 2 umfasst die Beschichtung von NCCs und C2C12-Zellen im Kokultursystem. Schritt 3 umfasst den Wundassay, der in darunter liegenden C2C12-Zellen durchgeführt wird, um die zelluläre Migrationskapazität zu bewerten. Schritt 4 umfasst die.......