Biolayer-Interferometrie-Technologie zum Nachweis von Wechselwirkungen zwischen Ligand und Analyt

Abstract

Quelle: Desai, M., et al. Anwendung der Biolayer-Interferometrie (BLI) zur Untersuchung von Protein-Protein-Wechselwirkungen in der Transkription. J. Vis. Exp. (2019)

In diesem Video demonstrieren wir die Biolayer-Interferometrie (BLI)-Technologie, um die intermolekularen Wechselwirkungen zwischen Liganden und Zielanalyten in Echtzeit zu detektieren. BLI misst Veränderungen im Interferenzmuster von weißem Licht, das von einer Schicht immobilisierter Liganden auf einer Biosensoroberfläche reflektiert wird, wenn sie mit Analyten in Lösung interagieren.

Protocol

1. Biosensor-Hydratation und Assay-Aufbau

1. Schalten Sie die BLItz-Maschine ein.
2. Stellen Sie sicher, dass das Gerät über einen USB-Datenausgang an der Rückseite des Geräts mit dem Computer verbunden ist.
3. Öffnen Sie auf dem Computer die zugehörige Software (z. B. BLItz Pro) und klicken Sie auf Advanced Kinetics auf der linken Seite des Bildschirms.
4. Geben Sie in der Software alle relevanten Informationen über das Experiment (einschließlich des Experimentnamens, der Beschreibung, der Proben-ID und der Proteinkonzentration) unter der jeweiligen Überschrift ein.
5. Klicken Sie auf Biosensortyp

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BLItz-Maschine	ForteBio	45-5000	Gerät
Ni-NTA-Biosensor-Tablett eintauchen und auslesen	ForteBio	Tel.: 18-5101	Gebrauchsfertige Ni-NTA-Biosensoren für Poly-His-markierte Proteine
Tropfenhalter	ForteBio	Tel.: 45-5004	Gerät
PCR-Röhrchen (0,2 mL)	Thomas Wissenschaftlich	CLS6571	Kunststoff-Ware
Mikrozentrifugenröhrchen (schwarz)	Thermo Fisher Scientific	Tel.: 03-391-166	Kunststoff-Ware
Kimwipes	Thermo Fisher Scientific	06-666A	Kunststoff-Ware
DVB-T	Thermo Fisher Scientific	Nr. R0861	chemisch
Edta	MilliporeSigma	Nr. E6758	chemisch
MgCl2	MilliporeSigma	M8266	chemisch
NaCl	MilliporeSigma	Nr. S9888	chemisch
Tris-HCl	GoldBio	T095100	Puffer