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ELISA-basierte Methode zur Analyse von Wechselwirkungen zwischen Köder- und Beuteproteinen

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Singh, B. et al., Assays zur Untersuchung der Rolle von Vitronectin bei bakterieller Adhäsion und Serumresistenz. J. Vis. exp. (2018)

Dieses Video beschreibt eine ELISA-basierte Technik, die Protein-Protein-Wechselwirkungen zwischen zwei Proteinen erkennt, indem die Bindung des zweiten Proteins an das immobilisierte erste Protein gemessen wird. Das gebundene zweite Protein wird mit spezifischen Antikörpern nachgewiesen, die mit einem Enzym markiert sind, wie z. B. Meerrettichperoxidase.

Protocol

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1. ELISA-Analyse der Wechselwirkung zwischen rekombinanter PH und Vn

HINWEIS: Steuerelemente müssen eingeschlossen werden, um unspezifische Bindungen auszuschließen. Als Positiv- bzw. Negativkontrollen werden humane Faktor H (FH) oder C4b-bindendes Protein (C4BP) verwendet.

  1. Verdünnen Sie jedes der humanen Proteine (Vn, FH und C4BP) separat auf 50 nM in Tris-HCl, pH 9,0 (Beschichtungspuffer). Geben Sie 100 μl Proteinlösung in jede Vertiefung einer Polysorp-Mikrotiterplatte. Verschließen Sie die Platten mit dem Deckel und lagern Sie sie über Nacht (16 h) bei 4 °C, um die Immobilisierung des Proteins in den Mikroti....

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AR2G-SensorenPall Life ScienceTel.: 18-5095Sensor zum immobilisierten Protein durch Aminokupplung
AcetonVWRArtikel-Nr.: 97064-786Grad der Analyse
Rinderserumalbumine (BSA)Sigma-AldrichNr. A2058Geeignet für Zellkulturen
C4BP (C4b-bindendes Protein)Complement Technology, Inc.Nr. A109Gekauft als gefrorene flüssige Form
ZitronensäureSigma-Aldrich251275-500GKlasse der American Chemical Society (ACS)
HRP-konjugierte Anti-His-Tag-AntikörperAbcam (EnglischAB1269Polyklonal
C4BPComplement Technology, Inc.Nr. A109Gefrorene Lösung
Säule aus Histidin-Affinitätsharz (HisTrap HP)GE Gesundheitswesen BiowissenschaftenTel.: 17-5247-01Säulen vorgepackt mit Ni-Sepharose
His-getaggt PHRekombinant exprimiert und gereinigt in unserem Labor
MethanoVWR BDH1135-1LPGrad der Analyse
Plasmid mit C-terminalem 6x His-Tag auf dem Rückgrat (pET26(b))NovagenArtikel-Nr.: 69862-3DNA-Vektor
Polysorb-MikrotiterplattenSigma-AldrichM9410Für ELISA
TetramethylbenzidinSigma-AldrichArtikel-Nr.: 860336-100MGELISA-Klasse
Vitronectin (Vn) aus menschlichem PlasmaSigma-AldrichV8379-50UGQualität von Zellkulturen
)

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ELISA MethodProtein Protein InteractionBait ProteinPrey ProteinHorseradish PeroxidaseMicroplate ReaderHistidine TagAnti His AntibodyPBS BufferBSA Blocking

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