ELISA-basierter Reporter-Assay zur Untersuchung der Rezeptor-Liganden-Interaktion in BW-Zellen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Elias, S. et al., Ein BW-Reportersystem zur Untersuchung von Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt die auf Reporter-Assays basierende Detektion der Rezeptor-Liganden-Interaktion. Die erfolgreiche Rezeptor-Liganden-Interaktion aktiviert den nachgeschalteten Signalweg und bewirkt die Bildung und Freisetzung von Zytokinen als sekretorische Reportermoleküle in der Lösung, was mit ELISA bestätigt wird.

Protokoll

>1. Erzeugung eines Plasmids, das das chimäre Konstrukt exprimiert

HINWEIS: Ziel ist es, ein Plasmid zu erzeugen, das die extrazelluläre Domäne des interessierenden Rezeptors exprimiert, das mit den Transmembran- und intrazellulären Domänen der CD3ζ-Kette der Maus fusioniert ist (Abbildung 1A).

Rufen Sie die Sequenz der extrazellulären Domäne des interessierenden Rezeptors einschließlich des Signalpeptids ab. Gewinnung von DNA-Material, von dem erwartet wird, dass es diesen Rezeptor exprimiert (z. B. cDNA oder ein Plasmid).
Gewinnung von DNA-Material, das die T....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Die Struktur des chimären Rezeptors-CD3ζ und das Design von PCR-Primern. (A) Allgemeine Struktur eines extrazellulären Rezeptors, der mit der Transmembran und den intrazellulären Domänen von CD3ζ der Maus fusioniert ist. (B) Die extrazelluläre Domäne des Rezeptors wurde mit einem 3'-Primer amplifiziert, der auch Nukleotide von CD3ζ enthielt. (C) Die intrazellulären und Transmembrandom.......