Dunkelfeldmikroskopie zur Visualisierung der Diffusionsdynamik von Nanostäbchen auf Zellmembran

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Ge, F., et al. Visualisierung der Diffusionsdynamik von Gold-Nanostäbchen auf Zellmembranen mittels Einzelnanopartikel-Dunkelfeldmikroskopie. J. Vis. Exp. (2021).

In diesem Video beschreiben wir die Technik der Dunkelfeldmikroskopie (DFM) in Kombination mit der Einzelpartikel-Tracking-Analyse (SPT), um die Wechselwirkung von plasmonischen Gold-Nanostäbchen mit der Zellmembran einer bestimmten Zelllinie von Interesse zu überwachen. Die kombinierte DFM- und SPT-Analyse ermöglicht die Visualisierung der Bewegung des Nanostäbchens durch die Zellmembran mit hoher räumlich-zeitlicher Auflösung.

Protokoll

>1. Vorbereitung des Objektträgers

HINWEIS: In SPT-Experimenten werden U87 MG-Zellen der dritten bis zehnten Generation mit hoher Aktivität verwendet.

22 mm × 22 mm Deckgläser, die bereits mit Piranha-Lösung gereinigt wurden, durch Eintauchen in Ethanol (99,9%) sterilisieren.
Nehmen Sie mit einer Pinzette das Deckglas aus der Ethanollösung (Schritt 1.1) und sterilisieren Sie es, indem Sie Ethanol auf der Flamme verbrennen. Sobald das gesamte Ethanol verbrannt ist, legen Sie die Deckgläser in eine Kunststoff-Zellkulturschale (35 x 10 mm), die mit 2 mL Zellmedium (kein Phenolrot) gefüllt ....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Schematische Darstellung des Strahlengangs der Dunkelfeldmikroskopie, der Vorbereitung von Objektträgern und der Zweikanal-Differenzmethode zur Berechnung des Polarwinkels (θ) von AuNRs. Der Maßstabsbalken im Bild beträgt 2 μm.

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Abbildung 2: Charakterisierung von CTAB-AuNRs. (A) TEM.......