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Statische Rasterkraftmikroskopie zur Visualisierung und Charakterisierung von zusammengesetzten Nukleosomen

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Stormberg, T., et al. Sondierung der Struktur und Dynamik von Nukleosomen mit Hilfe der Rasterkraftmikroskopie. J. Vis. Exp.(2019)

In diesem Video demonstrieren wir statische Rasterkraftmikroskopie, um zusammengesetzte Nukleosomen zu visualisieren. Dieses hochauflösende bildgebende Verfahren ermöglicht die Untersuchung der Nukleosomenstruktur.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Funktionalisierung der Glimmeroberfläche für die statische AFM-Bildgebung von Nukleosomen

  1. Bereiten Sie eine 50 mM 1-(3-Aminopropyl) Silatran APS-Stammlösung in deionisiertem Wasser wie beschrieben vor. 1 ml Aliquots dieser Lösung bis zur Verwendung bei 4 °C lagern.
    Anmerkung: Die Aliquote können mehr als ein Jahr bei 4 °C gelagert werden.
  2. Bereiten Sie eine funktionierende APS 1:300-Lösung für die Glimmermodifikation vor, indem Sie 50 μL des 50 mM APS-Stammes in 15 mL ddH 2O.
    Anmerkung: Diese Arbeitslösung kann mehrere Tage bei Raumtemperatur gelagert werden.
  3. ....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Abbildung 1: Schematische Darstellung des Prozesses zur Präparation von APS-funktionalisiertem Glimmer für die AFM-Bildgebung von Nukleosomen. (A) Bei einem Stück Glimmer mit einer Dicke von ~0,1 mm wurden beide Seiten frisch gespalten. (B) Das gespaltene Glimmerstück wird sofort diagonal in eine Küvette gelegt, die die APS-Lösung enthält, und für 30 Minuten inkubiert. (C) Nach dem APS-Funktionalisierungsschritt .......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
CENP-A/H4)2, rekombinant humanEpiCypher, Durham, NCTel.: 16-0010Katalognummer für 50 ug
H2A/H2B, rekombinant humanEpiCypher, Durham, NCTel.: 15-0311Katalognummer für 50 ug
H3 Octamer, rekombinanter MenschEpiCypher, Durham, NCTel.: 16-0001Katalognummer für 50 ug
Slide-A-Lyzer MINI Dialysegeräte-Kit, 10K MWCO, 0,1 mLThermoFischer Scientific, Waltham, MAArtikel-Nr.: 69574Katalognummer für 10 Geräte
NatriumchloridSigma-Aldrich, St. Louis, MONr. S9888-500GKatalognummer für 500 mg
Amicon Ultra-0,5 mL ZentrifugalfilterMillipore-sigma, Burlington, MOUFC501008Katalognummer für 8 Geräte
hclSigma-Aldrich, St. Louis, MOArtikel-Nr.: 258148-25MLKatalognummer für 25 mL
TricinSigma-Aldrich, St. Louis, MOT0377-25GKatalognummer für 25 g
SdsSigma-Aldrich, St. Louis, MO11667289001Katalognummer für 1 kg
Ammoniumpersulfat (AmmPS)Bio-Rad, Hercules, KalifornienArtikel-Nr.: 1610700Katalognummer für 10 g
30% Acrylamid/Bis-Lösung, 37,5:1Bio-Rad, Hercules, Kalifornien1610158Katalognummer für 500 mL
TEMEDBio-Rad, Hercules, KalifornienArtikel-Nr.: 1610800Katalognummer für 5 mL
4x Laemmli Protein-Probenpuffer für SDS-PAGEBio-Rad, Hercules, Kalifornien1610747Katalognummer für 10 mL
2-MESigma-Aldrich, St. Louis, MOM6250-10MLKatalognummer für 10 mL
ageRuler Leiter für vorgefärbte ProteineThermoFischer Scientific, Waltham, MAArtikel-Nr.: 26616Katalognummer für 500 μl
Bio-Safe™ Coomassie BeizeBio-Rad, Hercules, Kalifornien1610786Katalognummer für 1 L
Vliesstoff-Tücher für Reinräume: TX604 TechniClothTexWipe, Kernersvile, NCTX604
Muskovit Block GlimmerAshevilleMica, Newport News, VAKlasse-1
HEPESSigma-Aldrich, St. Louis, MOH4034-25GKatalognummer für 25 g
TesafilmScotch-3M, St. Paul, MN
TESPA-V2 AFM-Sonde (für statische Bildgebung)Bruker AFM-Sonden, Camarillo, Kalifornien
Millex-GP Filter, 0,22 μmSigma-Aldrich, St. Louis, MOSLGP05010Katalognummer für 10 Geräte
BL-AC10DS-A2 AFM-Sonde (für HS-AFM)Olympus, Japan
MultiMode-RasterkraftmikroskopBruker-Nano/Veeco, Santa Barbara, Kalifornien

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