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Quantifizierung der Membrankräuselbildung mittels Rasterelektronenmikroskopie

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Ahn, W. et al., Visualisierung der Membrankräuselbildung mit Rasterelektronenmikroskopie.J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video zeigt die Probenvorbereitung, Fixierung und Bildgebung einer Makrophagenzelle, die Membrankräusel mittels Rasterelektronenmikroskopie, REM zeigt. Detaillierte Informationen über die Membranmorphologie und -organisation sind entscheidend für das Verständnis des physiologischen Zustands der Zellen.

Protocol

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>1. Zelllinie und Zellkultur

  1. Züchten Sie RAW 264.7-Makrophagen in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), ergänzt mit 10 % (vol/vol) hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum (FBS), 100 IE/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin in einem befeuchteten Inkubator bei 37 °C und 5 % CO2. Ersetzen Sie Wachstumsmedien jeden zweiten Tag.
  2. Wenn die Zellen zu 80 % zusammenfließen, waschen Sie die Platte zweimal mit sterilem PBS.
  3. Trennen Sie die Zellen durch Zugabe von 1.000 μl 0,5 % Trypsin-EDTA und inkubieren Sie die Zellkulturplatte für 3-5 min in einem befeuchteten Inkubator bei 37 °C.
  4. Untersuchen Sie die Pla....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0,5 % Trypsin-EDTAGibcoArtikel-Nr.: 15400-054
2% GlutaraldehydElektronenmikroskopieArtikel-Nr.: 16320
4% ParaformaldehydSanta Cruz Biotechnologie281692
5-(N-ethyl-N-isopropyl)-amiloridSigma LebenswissenschaftenNr. A3085
Carbon-KlebelaschenElektronenmikroskopieTel.: 77825-09
DimethylsulfoxidCorning25-950-CQC
Dulbecco's Modifizierter Eagle MediumCytiva BiowissenschaftenSH30022.01
Falcon 24-Well-Multiwell-Zellkulturplatte mit klarem Flachboden und TC-BehandlungFalke353047
Fötales RinderserumZwillinge Biografie900-108
HERAcell 150i CO2-InkubatorThermo Fisher Scientific51026282
Hummer Modell 6.2 Sputter CoaterAnatech DeutschlandArtikel-Nr.: 58565
JSM-IT500HR Rasterelektronenmikroskop
Mikroskop-DeckglasThermo Fisher ScientificTel.: 12-545-82
Pen StrepGibcoNr. 15140-122
Phorbol 12-Myristat-13-acetatMillipore SigmaArtikel-Nr.: 524400
RAW 264.7 MakrophagenATCCATCC TIB-71
Rekombinantes humanes M-CSFPeprotech300-25
Samdri-790 Trockner für kritische PunkteTousimis Forschungsgesellschaft8778B
REM-Aluminium-ProbenhalterungenElektronenmikroskopieArtikel-Nr.: 75220
Natrium-CacodylatElektronenmikroskopie12300
Trypanblau-LösungThermo Fisher Scientific15250061
kg

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