Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes aus menschlichen Buffy Coats

Zusammenfassung

Quelle: Mily, A., et al. Polarisation von M1- und M2-Zellen aus humanen Monozyten und Analyse mit Durchflusszytometrie bei Mycobacterium tuberculosis-Infektion. J. Vis. (2020)

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes, PBMCs, die Monozyten und Lymphozyten enthalten, aus einem menschlichen Buffy-Coat durch Dichtegradientenzentrifugation. Die isolierten PBMCs können für weitere Analysen verwendet werden.

Protokoll

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Vorbereitung der Medien

HINWEIS: Details zu allen Reagenzien und Verbrauchsmaterialien finden Sie in der Materialtabelle.

1. RPMI Complete Medium: Ergänzen Sie RPMI 1640 mit 1 mM Natriumpyruvat, 2 mM L-Glutamin, 10 mM HEPES und 10% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum (FBS). Vermeiden Sie Antibiotika im Zel....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Lymphoprep	Alere Technologies AS	11508545
RPMI 1640	Life Technologies Corporation	SH30096.01
EDTA (0,5 Mio.)	Karolinska Universitätskrankenhaus, Huddinge	N/A
Na-Pyruvat	GE Healthcare Life Sciences	SH300239.01
L-Glutamin	GE Healthcare Life Sciences	SH30034.01
HEPES	GE Healthcare Life Sciences	SH30237.01
Fötales Rinderserum (FBS)	Sigma-Aldrich	Nr. F7524