Immunsysteme und deren Komponenten

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von Monozyten aus menschlichem Vollblut durch immunomagnetische negative Trennung. Die isolierten Monozyten können für weitere nachgelagerte Analysen verwendet werden.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von Kupffer-Zellen oder Lebermakrophagen aus der Leber der Maus. Die Leber wird mit einer Aufschlusslösung durchblutet, gefolgt von einer Dichtegradiententrennung. Die isolierten adhärenten Kupffer-Zellen können für die weitere Analyse verwendet werden.

Dieses Video demonstriert ein enzymfreies Protokoll zur Isolierung von Makrophagen aus dem Spinalganglion (DRG) der Maus unter Verwendung einer mechanischen Dissoziationstechnik. Nach der Homogenisierung des frisch entnommenen DRG-Gewebes werden Antikörper gegen die Zelloberflächenrezeptoren auf den Makrophagen verwendet, um die Zellen fluoreszierend zu markieren, gefolgt von einer Durchflusszytometrie, um das Vorhandensein von Makrophagen in der Probe zu bestätigen.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von Lymphozyten aus einem entnommenen Peyer-Pflaster der Maus. Die isolierten Lymphozyten können für weitere Analysen verwendet werden.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes, PBMCs, die Monozyten und Lymphozyten enthalten, aus einem menschlichen Buffy-Coat durch Dichtegradientenzentrifugation. Die isolierten PBMCs können für weitere Analysen verwendet werden.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von B-Zellen aus menschlichem peripherem Blut mit biotinylierten Antikörpern, die spezifisch für Nicht-B-Zellen sind, und Streptavidin-konjugierten magnetischen Mikrokügelchen.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung und Kultivierung von Knochenmark-Stromazellen aus den langen Knochen von Mäusen. Die isolierten adhärenten BMSCs können für die weitere Analyse verwendet werden.

Dieses Video zeigt die Isolierung von T-Zellen aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) unter Verwendung der funktionalisierten BACS-Technologie (Buoyancy-Activated Cell Sorting). Die Isolierungstechnik beinhaltet die positive Selektion von CD3+ T-Zellen, indem die Zellen mit biotinylierten Anti-CD3-Antikörpern markiert und die Antikörper-gebundenen Zellen mit Hilfe von Streptavidin-gebundenen Mikrobläschen getrennt werden.

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll für die Aktivierung menschlicher primärer T-Zellen. Die Inkubation naiver T-Zellen mit magnetischen Kügelchen, die mit Anti-CD3- und Anti-CD28-Antikörpern beschichtet sind, gefolgt von einer Interleukin-2- oder Interleukin-15-Behandlung, führt zur Aktivierung naiver T-Zellen und deren Differenzierung und Proliferation zu Effektor- oder Gedächtnis-T-Zellen.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von marginierenden Leberleukozyten aus der Mausleber durch erzwungene Perfusion.

Dieses Video zeigt die Isolierung von Lymphozyten, einschließlich natürlicher Killerzellen oder NK-Zellen, aus menschlichem Lebergewebe für die selektive Expansion. Der enzymatische und mechanische Verdau, gefolgt von der Trennung durch Dichtegradienten, fördert die Isolierung von Lymphozyten, einschließlich NK-Zellen. Die gesammelten Lymphozyten können für die selektive Vermehrung von NK-Zellen weiter verwendet werden.

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Expansion von natürlichen Killerzellen (NK) direkt aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) unter Verwendung einer Feeder-Zelllinie. PBMCs werden mit genetisch veränderten lymphoblastoiden Feeder-Zellen co-kultiviert, die membrangebundenes Interleukin-21 (mIL-21) exprimieren, und die Kultur wird mit den Zytokinen Interleukin-2 (IL-2) und Interleukin-15 (IL-15) ergänzt. Zusammen führt dieser Ligandencocktail zu einer verlängerten Expansion...

Dieses Video zeigt die Isolierung von Sertoli-Zellen aus Samenkanälchen der Maus, einer Komponente der Hoden. Enzymatischer Verdau und wiederholtes Waschen fördern die Freisetzung von Sertoli-Zellen in die Lösung, die zur Proliferation und zum Wachstum weiter kultiviert werden kann.

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur magnetischen Markierung einer niedrig konzentrierten Population von CD4+Vδ1+γδ T-Zellen aus humanen mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs). Mit einer Kombination aus FITC-konjugierten Anti-Vδ1-Antikörpern, magnetischen Anti-FITC-Mikrokügelchen und mit Anti-CD4-Antikörpern beschichteten superparamagnetischen Kügelchen können die CD4+Vδ1+ T-Zellen erfolgreich aus der PBMC-Population aufgereinigt werden.

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von zytotoxischen Neutrophilen hoher Dichte und Neutrophilen niedriger Dichte aus dem Blut einer tumortragenden Maus durch diskontinuierliche Saccharosegradientenzentrifugation.

Dieses Video zeigt das Isolierungsverfahren des zahnfleischartigen Immunzellnetzwerks aus einem Mausmodell. Durch die enzymatische Verdauung wird das Zahnfleischgewebe von den anhaftenden Zähnen und Knochen freigesetzt, das weiter mechanisch verdaut wird, wodurch Immunzellen aus dem Zahnfleisch freigesetzt werden. Die isolierten Zellen sind bereit für immunologische Experimente.

Dieses Video zeigt eine Peritonealspülungsmethode zur Isolierung reifer Bindegewebs-Mastzellen aus der Bauchhöhle erwachsener Mäuse. Nach der Isolierung einer Mischung aus primären Immunzellen aus der Bauchhöhle erfolgt die selektive Proliferation von Mastzellen unter geeigneten Kulturbedingungen.

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung von CD11b-Zellen, einschließlich Mikroglia, aus Mäuse-Welpengehirnen mittels magnetisch aktivierter Zellsortierung. Das Hirngewebe wird homogenisiert, um Einzelzellsuspensionen zu erhalten, die mit Anti-CD11b-Antikörpern beschichteten Mikrokügelchen inkubiert werden, gefolgt von einer magnetischen Säulentrennung, um die CD11b+-Zellpopulation zu reinigen.

Dieses Video zeigt das chirurgische Isolierungsverfahren des leistendrainierenden Lymphknotens aus einem Mausmodell. Der Schnitt in der Bauchregion ermöglicht den Zugang zum Leistenlymphknoten, der operativ entnommen wird. Der entnommene durchscheinende leistende Lymphknoten kann für immunologische Untersuchungen verwendet werden.

Dieses Video zeigt eine Seziertechnik zur Entnahme von kniekehlendrainierenden Lymphknoten aus den Hinterbeinen der Maus. Lymphknoten spielen eine entscheidende Rolle bei der Überbrückung der angeborenen und adaptiven Immunität, und die Entnahme intakter Lymphknoten – mit einer erhaltenen Gewebestruktur und zellulären Lebensfähigkeit – kann helfen, lokale und systemische Immunreaktionen zu untersuchen.

Dieses Video zeigt das Priming von primären Monozyten in Makrophagen. Primäre humane Monozyten können isoliert und unter Verwendung des Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktors (GM-CSF) zu einem M1-ähnlichen proinflammatorischen Phänotyp oder unter Verwendung des Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktors (M-CSF) zu einem M2-ähnlichen entzündungshemmenden Phänotyp differenziert werden.

Dieses Video beschreibt eine in vitro Methode zur Erzeugung von Makrophagen aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs). Die Erzeugung von Makrophagen aus iPSCs erfolgt in drei Stufen: (i) Aggregation von iPSCs in Suspension zu dreidimensionalen Embryoidkörpern (EBs), die sich in mesodermale Zellen differenzieren, (ii) Bildung von Makrophagen-Vorläuferzellen aus den differenzierten EBs und (iii) Differenzierung der Makrophagen-Vorläuferzellen zu reifen, funktionsfähigen...

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur Induktion der Differenzierung und Polarisation von Monozyten aus peripherem Blut in M1- oder M2-Makrophagen. Die Inkubation mit Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor, Lipopolysaccharid und Interferon-gamma ergibt proinflammatorische M1-Makrophagen, während die Inkubation mit Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor und Interleukin-4 die entzündungshemmende Produktion von M2-Makrophagen induziert.

Dieses Video zeigt einen In-vitro-Assay zur Erzeugung plasmazytoider dendritischer Zellen (pDCs) aus gängigen lymphoiden Vorläuferzellen (CLPs). Bei der Co-Kultivierung von gereinigten CLPs mit γ-bestrahlten Feeder-Zellen in Gegenwart von Fms-ähnlichen Tyrosinkinase-3-Liganden (FL) differenzieren sich die CLPs in nicht-adhärente pDCs, deren Vorhandensein mittels Durchflusszytometrie bestätigt wird.

Dieses Video zeigt die Erzeugung von unreifen, reifen und tolerogenen dendritischen Zellen (DCs) aus menschlichen Monozyten. Die Inkubation von Monozyten mit Wachstumsfaktoren und Zytokinen führt zur Produktion von unreifen DCs. Als Reaktion auf immunregulatorische Moleküle differenzieren sich unreife DCs in tolerogene und reife DCs.

Dieses Video zeigt die Differenzierung von Knochenmark-Stromazellen (BMSCs) in Adipozyten. Im zweistufigen Prozess differenzieren sich undifferenzierte BMSCs in Gegenwart von spezifischen Wachstumsfaktoren und Hormonen zunächst zu Präadipozyten. Der zweite Schritt, die Behandlung mit Glukose und Insulin, führt zur Bildung reifer Adipozyten mit mehreren Lipidtröpfchen.

Dieses Video zeigt eine Technik zur Differenzierung von Megakaryozyten und zur Bildung von Blutplättchen. Hämatopoetische Stammvorläuferzellen – isoliert aus menschlichem Nabelschnurblut – differenzieren sich in Gegenwart von Thrombopoietin zu reifen Megakaryozyten. Die reifen Megakaryozyten produzieren zytoplasmatische Fortsätze, die als Proplättchen bezeichnet werden und aus denen einzelne Blutplättchen hervorgehen.

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur Erzeugung funktioneller antigenspezifischer T-Zellen aus iPSC-abgeleiteten unreifen T-Zellen unter Verwendung eines dreidimensionalen Thymuskultursystems. Die Co-Kultivierung der iPSC-abgeleiteten unreifen T-Zellen mit endogenen lymphozytendepletierten Mäusen aus fetalen Thymuslappen führte zu einer erfolgreichen Reifung der T-Zellen zur Bildung von CD8αβ+ MHC-Klasse I+ iPSC-abgeleiteten Thymus-Emigranten (iTEs).

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll zur Reinigung von Blutplättchen aus murinem Vollblut und deren anschließende Aktivierung mit dem Thrombozytenagonisten Thrombin. Bei der Analyse mit Durchflusszytometrie werden die gereinigten Ruhethrombozyten anhand der Expression ihres Zelloberflächenmarkers CD41 charakterisiert, während gereinigte aktivierte Blutplättchen sowohl die Oberflächenmarker CD41 als auch CD62P koexprimieren.

Dieses Video zeigt eine in vitro Technik zur Erzeugung und Isolierung von neutrophilen extrazellulären Fallen (NETs). Neutrophile werden aus peripherem Blut isoliert und mit Phorbolmyristatacetat (PMA) stimuliert, um NETs zu produzieren. Während der Inkubation durchlaufen die Neutrophilen einen Prozess des Zelltods (NETose), um NETs freizusetzen, die aus dekondensiertem Chromatin bestehen, das mit granulären zytoplasmatischen Proteinen gemischt ist.

Dieses Video zeigt die in vitro Differenzierung von Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor oder GM-CSF-produzierenden T-Helferzellen (THGM). Isolierte naive T-Zellen werden für die Differenzierung in THGM stimuliert, was durch den Nachweis einer hohen intrazellulären GM-CSF-Produktion und einer geringen Expression anderer T-Helferzell-spezifischer Zytokine bestätigt wird.

Dieses Video zeigt einen kolorimetrischen Assay zur Bestimmung der Degranulationsaktivität von Mastzellen. Das von den Mastzellen freigesetzte Enzym hydrolysiert das Substrat und produziert ein farbiges Produkt. Die Degranulationsaktivität der Mastzellen wurde gemessen, da sich die prozentuale Freisetzung von Enzymen außerhalb der Zelle mit dem Gesamtenzymgehalt in der Zelle normalisierte.

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll für die durchflusszytometrische Sortierung von naiven B-Zell-, Gedächtnis-B-Zell- und Plasmablasten-Plasmazell-Subpopulationen aus menschlichen peripheren Blut-B-Zellen. Die verschiedenen B-Zell-Subpopulationen können anhand einer Fluorophor-basierten Antikörperbindung an die CD19-, CD27- und CD38-Rezeptoren unterschieden werden, die auf den B-Zell-Oberflächen exprimiert wird, gefolgt von einer Zellsortierung.

Dieses Video zeigt die Verwendung des ELISpot-Assays zur Beurteilung der Funktion von Antikörper-sezernierenden B-Zellen, ASCs. Die von den ASCs sezernierten Antikörper interagieren mit den membrangebundenen polyklonalen Antikörperfragmenten, die von den enzymkonjugierten IgG- oder IgM-Antikörpern nachgewiesen werden. Der farbige Fleck, der in jeder Vertiefung produziert wird, zeigt das Vorhandensein des Isotyps des spezifischen Antikörpers an, der mit der sekretorischen Aktivität der B-Zellen...

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung einzelner Zellen aus murinen pankreasdrainierenden Lymphknoten (PDLNs) und die Charakterisierung von regulatorischen T-Zellen (Tregs) aus der Einzelzellpopulation mittels Durchflusszytometrie. Die Tregs werden basierend auf der positiven Expression der Zelloberflächenmarker CD4, CD25 und Nrp1 sowie der nukleären Transkriptionsfaktoren Foxp3 und Helios identifiziert.

Quelle: Bello-Gamboa, A. et al., Imaging the Human Immunological Synapse.J. Vis. Exp.(2019)
Dieses Video zeigt die in vitro Studie der immunologischen Synapsenbildung zwischen einer Antigen-präsentierenden Zelle und Helfer-T-Lymphozyten unter Verwendung eines Fluoreszenzmikroskops. T-Zell-Rezeptoren von T-Helfer-Lymphozyten interagieren mit einem Antigen-MHC-II-Komplex in Antigen-präsentierenden Zellen und bilden immunologische Synapsen, gefolgt von sekretorischen Vesikelbewegungen in Richtung...

In diesem Video demonstrieren wir eine auf Durchflusszytometrie basierende Technik zur Bestimmung des Anteils von Zytokin-induzierten Killer-T-Zellen, CIK-Zellen, die aus einer mononukleären Zellkultur aus dem peripheren Blut expandiert wurden.

Dieses Video zeigt eine bildgebende Methode zur Visualisierung der in situ Interferon-gamma (IFN-γ) Sekretion in der Milz der Maus. Nach einer bakteriellen Infektion und der Induktion der IFN-γ-Akkumulation in T-Zellen und natürlichen Killerzellen wird die Milz aus der Maus entnommen. Nach der Entnahme von Gewebeschnitten wird eine Immunfärbung durchgeführt, um IFN-γ in den Zellen sichtbar zu machen.

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll für die Immunfärbung und konfokalmikroskopische Visualisierung von Makrophagen-extrazellulären Fallen (METs) in murinem Lungengewebe. Geweberesidente Makrophagen zeichnen sich durch die Expression des Makrophagen-spezifischen F4/80-Oberflächenglykoproteinmarkers aus, während METs durch Markierung der MET-Marker Matrix-Metalloproteinase 9, citrulliniertes Histon H3 und extrazelluläres Chromatin sichtbar gemacht werden.

Dieses Video zeigt eine effiziente Homogenisierungstechnik zur Erzeugung einer Antigen-adjuvanten Emulsion zur Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in einem Mausmodell. Die Emulsion enthält ein Autoantigen – Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein (MOG) – in der Wasserphase, umgeben von einer kontinuierlichen Ölphase, die aus einem inaktivierten pathogenen Bakterium besteht. Die Emulsion sorgt für eine anhaltende Freisetzung von Antigenen für eine verlängerte...

Dieses Video zeigt die Visualisierung von γδ intraepithelialen Lymphozyten (IELs) in transgenen Mäusen mittels konfokaler Mikroskopie. Der chirurgische Eingriff besteht darin, eine Perforationslinie zu schaffen und einen Längsschnitt zu machen, um die Darmschleimhaut und die Zotten freizulegen. Die transgenen Mäuse exprimieren Reporterproteine ausschließlich in γδ IELs, was ihre Verfolgung ermöglicht. Die intravitale Bildgebung erfasst die dynamische Bewegung von grün fluoreszenzmarkierten γδ...

Dieses Video zeigt die Erzeugung und Isolierung von T-Lymphozyten-abgeleiteten Mikropartikeln, LMPs, aus T-Lymphozyten nach der Behandlung mit Actinomycin-D.

Dieses Video beschreibt ein Protokoll zur Isolierung von seltenen Antigen-spezifischen CD8+ T-Zellen unter Verwendung von magnetischen Nanopartikel-basierten künstlichen antigenpräsentierenden Zellen (aAPCs), die mit antigenen, peptidbeladenen MHC-Igs und Anti-CD28-Antikörpern funktionalisiert sind. Die Interaktion der aAPCs mit CD8+ T-Zellen, die spezifisch die antigenen Peptid-Targeting T-Zell-Rezeptoren exprimieren, gefolgt von deren Expansion in vitro, führt zur Anreicherung und Expansion...

Dieses Video zeigt die Trennung von Neutrophilen von Trachealsekreten mit Hilfe eines mikrofluidischen Geräts mit spiralförmigen Kanälen. Das Gerät erreicht eine effiziente Trennung basierend auf der Zellgröße durch die Verwendung unterschiedlicher Dicken und trapezförmiger Kanäle. Das Zusammenspiel der Kräfte führt dazu, dass sich große Neutrophile in der Nähe der Innenwand ansammeln, während Erythrozyten und Muzinaggregate in der Nähe der Außenwand verbleiben, was eine effektive Trennung der...

In diesem Video demonstrieren wir die intrazelluläre Radiomarkierung von T-Helferzellen unter Verwendung von radioaktiven Isotopen-konjugierten monoklonalen Antikörpern für die nicht-invasive Positronen-Emissions-Tomographie-Bildgebung.