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Flotationsbasierte T-Zell-Isolierung mittels Auftriebs-aktivierter Zellsortierung

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Snow, T., et al. Flotationsbasierte T-Zellisolierung, -aktivierung und -expansion aus mononukleären Zellproben des menschlichen peripheren Blutes unter Verwendung von Mikroblasen. J. Vis. (2022)

Dieses Video zeigt die Isolierung von T-Zellen aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) unter Verwendung der funktionalisierten BACS-Technologie (Buoyancy-Activated Cell Sorting). Die Isolierungstechnik beinhaltet die positive Selektion von CD3+ T-Zellen, indem die Zellen mit biotinylierten Anti-CD3-Antikörpern markiert und die Antikörper-gebundenen Zellen mit Hilfe von Streptavidin-gebundenen Mikrobläschen getrennt werden.

Protocol

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>1. Isolierung von T-Zellen mit Mikrobläschen durch positive Selektion

HINWEIS: Dieses Protokoll beschreibt einen kleinen CD3+ positiven Selektionsansatz unter Verwendung von SAMBs.

  1. Inkubieren Sie 3 x 108 kommerziell hergestellte PBMC in 2,5 ml Trennpuffer mit biotinylierten Anti-CD3 (OKT3)-Antikörpern in einer Konzentration von 25 ng Antikörper pro 1 Million Zellen (25 ng/M). Mischen Sie vorsichtig, indem Sie auf und ab pipettieren, und inkubieren Sie es 10 Minuten lang bei Raumtemperatur.
  2. Fügen Sie Streptavidin-Mikrobläschen (SAMBs) in einem Verhältnis von 0,5 (S....

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Biotin Anti-Human-CD3 (OKT3) AntikörperBiolegendeArtikel-Nr.: 317320
LeukopakBioIVTHUMANLMX100-0001129
Normale humane PBMCsBioIVTHUMANHLPB-0002562
Streptavidin Microbubble Kit (enthält den Separationspuffer von Akadeum)AkadeumTel.: 11110-000

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Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

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