Kultivierung von aktivierten T-Zellen aus mononukleären Zellen des menschlichen peripheren Blutes

Zusammenfassung

Quelle: Mølgaard, K., et al. Echtzeitüberwachung der mitochondrialen Atmung in Zytokin-differenzierten menschlichen primären T-Zellen. J. Vis. Exp. (2021).

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll für die Aktivierung menschlicher primärer T-Zellen. Die Inkubation naiver T-Zellen mit magnetischen Kügelchen, die mit Anti-CD3- und Anti-CD28-Antikörpern beschichtet sind, gefolgt von einer Interleukin-2- oder Interleukin-15-Behandlung, führt zur Aktivierung naiver T-Zellen und deren Differenzierung und Proliferation zu Effektor- oder Gedächtnis-T-Zellen.

Protokoll

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Kultivierung aktivierter humaner primärer T-Lymphozyten

1. Auftauen der Zellen (Tag 1)
   1. 10 mL RPMI 1640 pro Probe auf etwa 37 °C vorwärmen.
   2. Nehmen Sie die gewünschte Anzahl mononukleärer Zellampullen aus dem peripheren Blut und lagern Sie sie vorübergehend auf Trockeneis.
   3. Die gefrorenen Zellen werden in 10 ml vorgewärmtem RPMI 1640 resus....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
24-Well-Gewebekulturplatte	Nunc	142485
Anti-CD3xCD28-Kügelchen	Gibco	11161D
X-VIVO 15	Lonza	BE02-060F
Human-Serum	Sigma Aldrich	Nr. H4522	Hitze inaktiviert bei 56 °C für 30 min
IL-15	Peprotech	Nr. 200-02
IL-2	Peprotech	200-15
Lymphoprep	Stammzellen-Technologien	7801
Pbs	Thermo Fischer	10010023
RPMI 1640	Gibco-Thermo Fischer	61870036
T-Küvetten-Perlen Magnet DynaMag-2 Magnet	Thermo Fischer	12321D