Eine Dissektionsmethode zur Entnahme von murinen Kniekehle-Drainagelymphknoten für die ex vivo-Bildgebung

Zusammenfassung

Quelle: Rezende, R. M., et al. Visualisierung der Lymphknotenstruktur und zellulären Lokalisation mittels ex-vivo konfokaler Mikroskopie. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt eine Seziertechnik zur Entnahme von kniekehlendrainierenden Lymphknoten aus den Hinterbeinen der Maus. Lymphknoten spielen eine entscheidende Rolle bei der Überbrückung der angeborenen und adaptiven Immunität, und die Entnahme intakter Lymphknoten – mit einer erhaltenen Gewebestruktur und zellulären Lebensfähigkeit – kann helfen, lokale und systemische Immunreaktionen zu untersuchen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Chirurgischer Eingriff zur Entfernung des Kniekehle-drainierenden Lymphknotens

1. Euthanasieren Sie Mäuse mit CO₂ -Erstickung, gefolgt von einer Gebärmutterhalsluxation.
2. Ruhigstellen Sie Mäuse in Bauchlage auf dem Acryltisch mit Klebeband und tragen Sie Mineralöl mit einem Wattestäbchen in Wade und Knie auf (Abbildung 1A-D).
3. Führen Sie einen Mittellinienschnitt in der Wade von der Ferse bis zum Knie durch (Abbildung 1E, F).
4. Die Wadenmuskulatur von der Haut trennen (Abbildung 1F, G).
5. Legen Sie die Kniekehle frei (Abbildung 1G). Der Kniekehlenlymphknoten erscheint als transluzide Kugel in der Kniekehlegrube.
6. Entfernen Sie den Kniekehle-Lymphknoten mit einer mikrochirurgischen gebogenen Pinzette (Abbildung 1G).
7. Alternativ können Sie die Maus in Rückenlage umdrehen und sich der Kniekehle zwischen Bizeps femoris und Semitendinosus nähern, um die Kniekehle LN zu entfernen, indem Sie einen Mittellinienschnitt in der Wade von der Ferse bis zum Knie durchführen, gefolgt von einer Dissoziation der Wadenmuskulatur von der Haut
   Anmerkung: Die Kniekehle ist eine flache Vertiefung, die sich an der Rückseite des Kniegelenks befindet. Öffnen Sie vorsichtig, um den Kniekehle-Lymphknoten zu sehen.

Ergebnisse

Abbildung 1: Präparation der Kniekehle-Lymphknoten. (A, B) Subkutane Injektion des FACS-Antikörper-Mastermixes in das Pfotenpolster. (C, D) 3 h nach der Injektion die Maus einschläfern, die Maus auf einer Acrylplatte mit Klebeband immobilisieren (C) und Mineralöl auf die Bauchhaut auftragen, um eine Fellablagerung um den Schnitt herum zu verhindern (D). (...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Cellview Kulturschale	Greiner-Biografie	627861	35x10 mm mit Glasboden
Kimwipes	Die Marke Kimtech Science	7557	Größe 21 x 20 cm / 100 Blatt pro Karton
Mikrochirurgie gebogene Pinzette	WEP Chirurgische Instrumente	maßgearbeitet	ca. 12,5 cm
Gebogene Schere für Mikrochirurgie	WEP Chirurgische Instrumente	maßgearbeitet	ca. 11,5 cm

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